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植物類胡蘿卜素含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號: BC4330

規(guī)格: 50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

提取液：自備80%丙 酮,，將丙 酮:蒸餾水（V:V）=4:1混合待用,，提供一個125mL空瓶。

產(chǎn)品說明：

類胡蘿卜素( carotenoid)是一類重要的天然色素的總稱,，普遍存在于動物,、高等植物,、真菌,、藻類的黃色,、橙紅色或紅色的色素之中。類胡蘿卜素是體內(nèi)維生素A的前體,，同時還具有抗氧化,、免疫調(diào)節(jié)、抗癌,、減輕心血管疾病及著色劑等作用,。

植物的類胡蘿卜素存在于各種黃色質(zhì)體或有色質(zhì)體內(nèi)；如黃葉,，黃色花卉,，黃色和紅色的果實(shí)和黃色塊根等組織，樣本通過溶劑萃取,，分離提取類胡蘿卜素,，在440±10nm處有特殊吸收峰。

大部分高等植物和藻類微生物的葉綠體內(nèi)也含有類胡蘿卜素,，類胡蘿卜素主要吸收藍(lán)紫光,，而葉綠素a和葉綠素b既吸收紅光又可吸收藍(lán)紫光。所以針對含葉綠體的組織,，為排除葉綠素a和葉綠素b對類胡蘿卜素的干擾,，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式先計(jì)算出葉綠素a和葉綠素b的含量，再進(jìn)一步得出類胡蘿卜素的含量,；針對不含葉綠素的組織可以直接根據(jù)類胡蘿卜素的經(jīng)驗(yàn)消光系數(shù)進(jìn)行計(jì)算,。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì),、臺式離心機(jī)、1mL玻璃比色皿,、天平,、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器,、10mL離心管/試管,、蒸餾水和丙 酮。

操作步驟：

一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1、新鮮植物葉片（去掉中脈）或其他組織用蒸餾水洗干凈,，然后吸干表面水分,，稱取約0.1g，剪碎放入研缽或勻漿器中,。

2,、加入1mL蒸餾水,，少量試劑一（約10mg），在黑暗或弱光條件下充分研磨,，轉(zhuǎn)入10mL離心管或試管中,。

3、用提取液沖洗研缽或勻漿器,，將所有沖洗液轉(zhuǎn)入10mL離心管或試管中,，用提取液定容至10mL，置于黑暗條件或者包上錫箔紙浸提3h（期間可以顛倒混合2次）,，觀察底部組織殘?jiān)咏诎咨珓t提取全,，若組織殘?jiān)慈儼祝^續(xù)浸提至組織殘?jiān)伾咏诎咨?/span>

二,、測定步驟

A,、黃色或其他非綠色組織（不含葉綠體）類胡蘿卜素含量測定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至440nm,，用提取液調(diào)零。

2,、取上層浸提液1mL于1mL玻璃比色皿中,，測定440nm處吸光值，記為A₄₄₀,。

B,、新鮮植物葉片或其他綠色組織（含葉綠體）類胡蘿卜素含量測定步驟：

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)多波長至470nm,、646nm和663nm，用提取液調(diào)零,。

2,、 取上層浸提液1mL于1mL玻璃比色皿中，測定470nm,、646nm和663nm處吸光值,，分別記為A₄₇₀、A₆₄₆和A₆₆₃,。

注意：若上層浸提液有殘?jiān)?，可吸?/span>1.2mL上層浸提液置于1.5mL棕色EP管，常溫下4000r/min離心5min,，再取上清液檢測,。

三、類胡蘿卜素含量的計(jì)算：

A、黃色或其他非綠色組織（不含葉綠體）類胡蘿卜素含量的計(jì)算公式：

類胡蘿卜素含量（mg/g 質(zhì)量）=A₄₄₀÷（ε×d）×V 樣總×1000÷W×F=0.04×A₄₄₀×F÷W

V樣總：提取液總體積,，0.01L,；1000：單位換算系數(shù)，1g =1000mg,；ε：類胡蘿卜素經(jīng)驗(yàn)消光系數(shù)，250 L/g/cm,；d：比色皿光徑,，1 cm；F：稀釋倍數(shù),；W：樣本質(zhì)量,，g。

B,、新鮮植物葉片或其他綠色組織（含葉綠體）類胡蘿卜素含量的計(jì)算公式：

C_a（mg/L）=12.21×A₆₆₃-2.81×A₆₄₆

C_b（mg/L）=20.13×A₆₄₆-5.03×A₆₆₃

類胡蘿卜素濃度：C_c（mg/L）=（1000×A₄₇₀-3.27×C_a-104×C_b）÷229=4.367×A₄₇₀-0.014×C_a-0.454×C_b

類胡蘿卜素含量（mg/g 質(zhì)量）=C_c×V提取×F÷W =0.01×C_c×F÷W

V提?。禾崛∫后w積，0.01L,；F：稀釋倍數(shù),；W：樣本質(zhì)量，g,。

注意事項(xiàng)：

1. 若不確定組織中有無葉綠素影響,，可取樣本提取液采用分光光度計(jì)在波長400-700nm下進(jìn)行掃描，看波長640-670nm之間有無波峰,，有波峰則為有葉綠素,，反之則無。

2. 當(dāng)A超過1時,，建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測定,，計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)F。

3. 為了避免色素見光分解,，操作時應(yīng)盡量避光,，研磨或勻漿時應(yīng)盡量縮短時間。

4. 提取液易揮發(fā),，操作時做好防護(hù)措施,。

5. 測定大量樣本時，注意比色池中用來調(diào)零校正的比色皿中的提取液的液面位置,，防止揮發(fā)造成誤差,。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g黃花加入1mL蒸餾水、少量試劑一（約10mg）,，在黑暗或弱光條件下充分研磨,，轉(zhuǎn)入10mL離心管，提取液沖洗研缽或勻漿器，用提取液定容至10mL,，置于黑暗條件或者包上錫箔紙浸提3h（期間可以顛倒混合2次）,，按照操作步驟A，測得A440=0.316,，計(jì)算含量得：

類胡蘿卜素含量（mg/g 質(zhì)量）=0.04×A₄₄₀÷W=0.1264 mg/g 質(zhì)量,。

2. 取0.1g綠蘿加入1mL蒸餾水、少量試劑一（約10mg）,，在黑暗或弱光條件下充分研磨,，轉(zhuǎn)入10mL離心管，提取液沖洗研缽或勻漿器,，用提取液定容至10mL,，置于黑暗條件或者包上錫箔紙浸提3h（期間可以顛倒混合2次），按照操作步驟B,，測得A470=0.746,，A646=0.285，A663=0.686,。計(jì)算得：

C_a（mg/L）=12.21×0.686-2.81×0.285=7.5752 mg/L,；C_b（mg/L）=20.13×0.285-5.03×0.686=2.2865 mg/L；C_c（mg/L）=4.367×0.746-0.014×C_a-0.454×C_b=2.1137 mg/L,；計(jì)算含量得：

類胡蘿卜素含量（mg/g 質(zhì)量）=C_c×V提取÷W =0.01×C_c÷W=0.2114 mg/g 質(zhì)量,。

相關(guān)系列產(chǎn)品：

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