目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>光合作用系列>> BC3400-50T/48SPFP試劑盒 光合作用
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
| 貨號 | BC3400 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸轉移酶(PFP)檢測 |
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動,，請注意并嚴格按照該說明書操作,。
貨號：BC3400
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體55 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
試劑四 | 液體×2支 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體×2支 | -20℃保存 |
試劑六 | 液體60 μL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1,、 試劑二：臨用前加6 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存兩周,，禁止反復凍融,。
2、 試劑三：臨用前加6 mL蒸餾水充分溶解,；用不完的試劑分裝后-20℃保存兩周,，禁止反復凍融。
3,、 試劑四：臨用前取1支加入0.3 mL蒸餾水溶解備用,，2-8℃保存一周。
4,、 試劑五：臨用前取1支加入0.3 mL蒸餾水溶解備用,，-20℃分裝保存一周，禁止反復凍融,。
5,、 試劑六：臨用前加入0.6 mL蒸餾水溶解備用,，2-8℃保存一周，也可按比例現(xiàn)用現(xiàn)配,。
產(chǎn)品說明：
焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸轉移酶（PFP,，EC2.7.1.90）是一種胞質酶，廣泛存在于植物組織中,，與磷酸果糖激酶一樣催化果糖-6-磷酸的磷酸化,，單PEP催化反應為可逆反應，并以焦磷酸代替ATP,，在光合作用碳代謝中起重要作用,。
PFP催化6-磷酸果糖轉化為1,6-二磷酸果糖，它在醛縮酶和磷酸丙糖異構酶的作用下轉變?yōu)榱姿岫u丙 酮,，再由α-磷酸甘油脫氫酶和NADH 催化生成3-二磷酸甘油和NAD,，340nm處的吸光度變化反映了PFP的活性的高低。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測,。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機,、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱,、1 mL石英比色皿、可調式移液槍,、研缽/勻漿器,、冰和蒸餾水、EP管,。
操作步驟：
一,、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1,、組織：按照質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1 g,，加入1 mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃,，20000 g離心15 min,，取上清置冰上待測；
2,、細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1 mL提取液）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率300 W，超聲3 s,，間隔7 s，總時間3 min）,；然后4℃,，20000 g離心15 min,，取上清置冰上待測；
3,、液體：直接檢測,。
二、測定步驟
1,、 分光光度計預熱30 min以上,，調節(jié)波長至340 nm，蒸餾水調零,。
2,、 操作表：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 空白管 |
試劑一 | 670 | 670 |
試劑二 | 100 | 100 |
試劑三 | 100 | 100 |
試劑四 | 10 | 10 |
試劑五 | 10 | 10 |
試劑六 | 10 | 10 |
樣本 | 100 | - |
蒸餾水 | - | 100 |
充分混勻于1 mL石英比色皿中測定37℃條件下，340 nm處初始值A1和30 min的吸光值A2,，分別記為A1測定管,、A1空白管、A2測定管,，A2空白管,。計算 ΔA= （A1測定管-A2測定管）-（A1空白管-A2空白管）。 注：也可將試劑一,、二,、三、四,、五,、六按操作表比例，配制成工作液,，現(xiàn)配現(xiàn)用,；空白管只需做1-2次。 | ||
三,、焦磷酸：果糖6-磷酸-1磷酸轉移酶活性的計算
（1）按照樣本蛋白濃度計算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
PFP（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷(V樣×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
PFP（U/g 質量）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷(W×V樣÷V提取) ÷T=53.59×ΔA÷W
（3）按照細胞數(shù)量計算
酶活單位定義：每104個細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
PFP（U/104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷(V樣×細胞數(shù)量÷V提取) ÷T=53.59×ΔA÷細胞數(shù)量
（4）按照液體體積計算
酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
PFP（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷V樣÷T=53.59×ΔA
V反總：反應體系總體積，0.001 L,；ε：NADH摩爾消光系數(shù),，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑,，1 cm,；V樣：加入樣本體積，0.1 mL,；V提?。杭尤胩崛∫后w積,，1 mL；T：反應時間,，30 min,；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL,；W：樣本質量,，g；109：換算系數(shù),，1mol=109 nmol,。
注意事項：
1、每次檢測樣本數(shù)不宜太多以免耽誤過多的酶促反應時間,。
實驗實例：
1,、取0.1g豆芽進行樣本處理，取上清后按照測定步驟操作,，測得計算 A1測定管-A2測定管=1.041-0.963=0.078,、A1空白管-A2空白管=0、ΔA=（A1測定管-A2測定管）-（A1空白管-A2空白管）=0.078,，按照樣本質量計算酶活得：
PFP（U/g 質量）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷(W ×V樣÷V提取) ÷T=53.59×ΔA÷W=41.8 U/g 質量,。
相關系列產(chǎn)品：
BC0990/BC0995 植物葉綠素含量檢測試劑盒
BC2210/BC2215 3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）活性檢測試劑盒
BC4330/BC4335 植物類胡蘿卜素含量檢測試劑盒
PFP試劑盒 光合作用 PFP試劑盒 光合作用
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