目錄:北京索萊寶科技有限公司>>填料-瓊脂糖凝膠>>凝膠過(guò)濾填料-瓊脂糖凝膠系列>> 辛基- - 瓊脂糖凝膠 HP
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更新時(shí)間:2024-07-29 15:09:06瀏覽次數(shù):1393評(píng)價(jià)
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辛基- - 瓊脂糖凝膠 P HP 說(shuō)明書 :
貨號(hào) :S9290
規(guī)格 :25ml
保存 :4℃~30℃保存,保質(zhì)期 3 年,。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介 :
辛基-瓊脂糖凝膠HP是將辛基鍵合在瓊脂糖凝膠上形成的一種可利用疏水相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純
化分離的疏水類介質(zhì),。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離,。
本品為白色球狀凝膠,,無(wú)嗅、無(wú)味,、無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì),。
理化指標(biāo):
項(xiàng) 目 指 標(biāo)
配 基 R-O-CH 2 -CH(OH)-CH 2 -O- (CH 2 ) 7 -CH 3
基 質(zhì) 交聯(lián)瓊脂糖
形 狀 球形
粒 徑 24~44 µm
蛋白質(zhì)吸附容量(HSA) 15-20mg/ml
流速(25℃) 100 cm/h *
耐 壓 0.15 MPa
工作溫度 4~40℃
pH 適用范圍 2~14(短時(shí)間,在位清洗) ,;3~12(長(zhǎng)時(shí)間)
化學(xué)穩(wěn)定性
以下溶液中穩(wěn)定:
1mol/L NaOH,;70%EtOH;30%異丙醇,;0.5%SDS,;
6mol/L 鹽酸胍;8mol/L 尿素,;3 mol/L(NH 4 ) 2 SO 4
*柱子:內(nèi)徑 50mm,、柱長(zhǎng) 30cm。柱床高 15cm,25℃, 流動(dòng)相為 0.1mol/LNaCl,。
使?說(shuō)明 :
辛基-瓊脂糖凝膠 HP 是一種疏水層析介質(zhì),,利用樣品中組分疏水性的不同進(jìn)行分離。用于生物大分子
的純化分離,。
操作流程:
1 ,、 裝柱
(1)讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
(2)根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠,,清洗掉 20%乙醇,,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1 的
比例)配成勻漿,。
(3)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜) ,,務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
(4)用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),,注意勿使產(chǎn)生氣泡,。打開(kāi)柱子出液口,使凝膠在柱
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內(nèi)自由沉降,,連結(jié)好柱子頂端柱頭,。
(5)打開(kāi)蠕動(dòng)泵,讓緩沖液用使用時(shí)流速的 1.33 倍的流速流過(guò),,使柱床穩(wěn)定,。用 2~3 倍柱體積的緩沖液
平衡柱子。
2 ,、 平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子,到流出液電導(dǎo)和 pH 不變,。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,,
如 0.02~0.05mol/L 的 PBS 加 1~2.5mol/L(NH 4 ) 2 SO 4 等。
3 ,、 上樣
(1)樣品用平衡液配制,,渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。
(2)一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,,用平衡液洗去雜質(zhì),,再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
(3)介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì),、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度,。鹽濃度大、溫度高
或樣品組分疏水性強(qiáng),,介質(zhì)對(duì)組分吸附牢,。
4 、 洗脫
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫,。加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫,。常用的洗脫液是低鹽濃
度緩沖液,如 0.02~0.05mol/L 的 PBS,。
5 ,、 再生
一般用低鹽濃度的緩沖液洗,洗 10 倍以上柱體積,接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡,,可再次使用,。
若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉,,可用在位清洗(CIP)除去,。
6 ,、 在位清洗
(1)對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白,,可以用 2M Nacl 去除。
(2)對(duì)沉淀蛋白,、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類,,可用 1M NaOH 去除,。
(3)對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白,、脂類等,,用 4~10 倍柱體積的 70%乙醇或 30%異丙醇清洗,但要注意有機(jī)溶
劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,,否則容易產(chǎn)生氣泡,。
清洗完畢后,,用少 3 倍緩沖液平衡柱子。
7 ,、 注意
在裝柱,、使用和保存柱子的時(shí)候,,要避免柱子流干,氣泡進(jìn)入,。
8 、 去熱源
用 0.5M 的氫氧化鈉清洗柱子 5~6 小時(shí)或用 0.1M 的氫氧化鈉 24 小時(shí),?;蛴靡韵路椒ú襟E去除:
(1)2 倍柱體積的 70%乙醇,;
(2)2 倍柱體積 50mM Tris-Hcl pH7.5,;
(3)1 倍柱體積 4M 尿素;
(4)3 倍柱體積的 Tris 緩沖液+0.1M Nacl,;
以上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。
9 ,、 消毒
用 0.5~1M NaOH 室溫下洗 8~10 倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子,。
注意事項(xiàng) :
產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在 4℃~30℃(保存溶液為 20% 乙醇+0.1M 醋酸鈉) ,,通風(fēng),、干燥,、清潔的地方,。不能
冷凍,。用過(guò)的柱子貯存在 4℃(20% 乙醇) ,。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)