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酵母基因組DNA大量提取試劑盒

產(chǎn)品簡介： 
本試劑盒采用可以特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，提取酵母基因組 DNA,。離心吸附柱中 采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料,，能夠高效專一吸附 DNA，可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機 化合物,。提取的基因組 DNA 片段大,，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠,。使用本試劑盒提取的基因組 DNA 可用于各種常規(guī) 操作,，包括酶切、 PCR,、文庫構(gòu)建,、Southern 雜交等實驗。 

操作步驟： 
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,，加入體積請參照瓶體上的標(biāo)簽,。所有離心步驟均為使用臺式離心機在 室溫下離心。 
1,、在離心管中收集酵母細(xì)胞 20-40ml(不超過 109 ce l1 s),，10000rpm 離心 1min，盡量吸除上清,。 
2,、酵母細(xì)胞壁的破除：向酵母菌體中加入 9ml 山梨醇 Buffer。充分懸浮菌體,，加入 600ul 酵母破壁酶和 100ul 巰 基還原劑,，充分混勻。30℃處理 1-2h,，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,。 
3、10000rpm 離心 lmin，棄上清,，收集沉淀,。 
4、向沉淀中加入 5ml 溶液 A,，充分懸浮沉淀,，向懸浮液中加入 500ul 的 RNase A(10mg/ml)，充分顛倒混勻,，室溫 放置 10min,。 
5、加入 500ul 的蛋白酶 K(10mg/ml),，充分顛倒混勻。65℃水浴消化 30-60min,，消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次,， 直樣品消化*為止。 
6,、加入 5ml 溶液 B,，再加入 5ml 無水乙醇，充分顛倒混勻,，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀,，不影響 DNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,，室溫放置 2min,。 
7、10000rpm 離心 2min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。 
8,、向吸附柱中加入 7ml 漂洗液(使用前請先檢查是否己加入無水乙醇),。10000rpm 離心 1min，棄廢液,，將吸附柱 放入收集管中,。 
9、向吸附柱中加入 7ml 漂洗液,， 10000rpm 離心 l min,， 棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。 
10,、10000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘,，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,， 否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)實驗如酶切,、PCR 等。 
11,、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,，向吸附膜中央懸空滴加 1-2ml 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置 5min,， 10000rpm 離心 l min,。 
12、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,，10000rpm 離心 2 min,，即可得到高質(zhì)量的基因組 DNA。 

注意事項： 
1,、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,，否則會導(dǎo)致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。 
2,、若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀,，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果,。 
3,、如果實驗中的離心步驟出現(xiàn)柱子堵塞的情況，可適當(dāng)延長離心時間,。 
4,、洗脫緩沖液的體積不少于 1ml，體積過小會影響回收效率,；洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影響,，若需要 用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)此范圍)， pH 值低于 7. 0 會降低洗脫效率,。 DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,，以防 DNA 降解。 
5,、 DNA 濃度及純度檢測：得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間,、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。 回 收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度,。DNA 應(yīng)在 OD260處有顯著吸收峰,，OD260 值為 1.0 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、40μg/ml 單鏈 DNA,。OD260/0D280比值應(yīng)為 1.7-1.9,，如果洗脫時不使用洗 脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低,，因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值,，但并不表示純度低。 

相關(guān)產(chǎn)品：
D1010 6×DNA Loading Buffer 
T1060 50×TAE 緩沖液 T1050 5×TBE 緩沖液 
M1060 D2000 DNA Ladder M1400 1kb DNA Ladder 
G8142 GoldView II 型核酸染色劑(5000×) 
D1160 酵母質(zhì)粒提取試劑盒

相關(guān)文獻：

《A rapid and efficient one-step site-directed deletion, insertion, and substitution mutagenesis protocol》 作者:Deguang Wu,，Xuewu Guo,，Jun Lu，Xi Sun,，F(xiàn)eng Li,，Yefu Chen，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23256925
《Enhanced freeze tolerance of baker’s yeast by overexpressed trehalose-6-phosphate synthase gene (TPS1) and deleted trehalase genes in frozen dough》 作者:Haigang Tan,Jian Dong,Guanglu Wang,Haiyan Xu,Cuiying Zhang,Dongguang Xiao 期刊:Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology 影響因子:2.533 PMID:24951963
《A two-step integration method for seamless gene deletion in baker’s yeast》 作者:Jian Dong,，Guanglu Wang,，Cuiying Zhang，Haigang Tan,，Xi Sun,，Mingyue Wu，Dongguang Xiao 期刊:Analytical Biochemistry 影響因子:2.275 PMID:23597844
 

酵母基因組DNA大量提取試劑盒