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疏水層析填料 丁基-瓊脂糖凝膠 4B
貨號 :S9280
規(guī)格 :25ml
簡介
丁基-瓊脂糖凝膠 4B是將苯基鍵合在瓊脂糖凝膠4B上形成的一種可利用疏水相互作用來實現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純化分離的疏水類介質(zhì)。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離,。
本品呈白色球狀凝膠,,無嗅、無味,、無肉眼可見雜質(zhì),。
理化 特性
項 目 | 指 標(biāo) |
配基 | 丁基 |
基質(zhì) | 4% 交聯(lián)瓊脂糖凝膠 |
形狀 | 球形 |
粒徑 | 45~165 µm |
配基密度 | 6-14 µmol/ml 介質(zhì) |
高流速(25℃) | 100KPa 下 50 cm/h * |
耐壓 | 0. 1MPa |
工作溫度 | 4~40℃ |
pH 適用范圍 | 4~8(短時間 ,在位清洗) ,;4~8(長時間 |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 以下溶液中穩(wěn)定: pH4~8 中穩(wěn)定,;0.1% triton 水溶液和 1%MOPS 溶 液中穩(wěn)定;5%甲醛中基本穩(wěn)定 |
*柱子:內(nèi)徑16mm,、柱長10cm,,柱床高5cm,25℃,,流動相為0.1mol/LNaCl,。
三 、 適用范圍
丁基-瓊脂糖凝膠 4B是一種疏水層析介質(zhì),,利用樣品中組分疏水性的不同進(jìn)行分離,。用于生物大分子的純化分離。
四 ,、 保存條件
產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在 4℃~30℃(保存溶液為 20% 乙醇+0.1M 醋酸鈉) ,通風(fēng),、干燥,、清潔的地方,。不能冷凍。用過的柱子貯存在 4℃(20% 乙醇) ,。
保質(zhì)期:5 年,。
五 、 操作步驟 :
1 ,、 裝柱
(1)讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫,。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
(2)根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠,,清洗掉 20%乙醇,,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1 的比例)配成勻漿,。
(3)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜) ,,務(wù)必使底端無氣泡。
(4)用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),,注意勿使產(chǎn)生氣泡,。打開柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,,連結(jié)好柱子頂端柱頭,。
(5)打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過,,使柱床穩(wěn)定,。用 2~3 倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2 ,、 平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,,到流出液電導(dǎo)和 pH 不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,,如 0.02~0.05mol/L 的 PBS 加 1~2.5mol/L(NH4)2SO4 等,。
3 、 上樣
(1)樣品用平衡液配制,,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣,。
(2)一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,用平衡液洗去雜質(zhì),,再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)物,。
(3)介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動相的離子強(qiáng)度和溫度,。鹽濃度大,、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng),介質(zhì)對組分吸附牢,。
4 ,、 洗脫
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫,。加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫。常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液,,如 0.02~0.05mol/L 的 PBS,。
5 、 再生
一般用低鹽濃度的緩沖液洗,,洗 10 倍以上柱體積,,接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用,。若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時洗不掉,,可用在位清洗(CIP)除去。
6 ,、 在位清洗
(1)對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白,,可以用 2M Nacl 去除。
(2)對沉淀蛋白,、對以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類,,可用 1M NaOH 去除。
(3)對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白,、脂類等,,用 4~10 倍柱體積的 70%乙醇或 30%異丙醇清洗,但 要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,,否則容易產(chǎn)生氣泡,。
清洗完畢后,用少 3 倍緩沖液平衡柱子,。
7 ,、 注意
在裝柱、使用和保存柱子的時候,,要避免柱子流干,,氣泡進(jìn)入。
8 ,、 去熱源
用 0.5M 的氫氧化鈉清洗柱子 5~6 小時或用 0.1M 的氫氧化鈉 24 小時,。或用以下方法步驟去除:
(1)2 倍柱體積的 70%乙醇,;
(2)2 倍柱體積 50mM Tris-HCl pH7.5,;
(3)1 倍柱體積 4M 尿素;
(4)3 倍柱體積的 Tris 緩沖液+0.1M NaCl,;
以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制,。
9 、 消毒
用 0.5~1M NaOH 室溫下洗 8~10 倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子,。
疏水層析填料 丁基-瓊脂糖凝膠 4B訂購說明:
1,、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨,。
2、部分非常用產(chǎn)品,,需提前1-2日預(yù)訂,,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3,、部分產(chǎn)品價格會因貨期,、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn),。
4,、每日訂單截止時間為16點整,部分城市可到17點整,,因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨,。
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運輸說明:
1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸,。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,,放入索萊寶的箱子,,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,,為您的實驗保駕護(hù)航。
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