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凝膠過濾填料 Sepharose 4B/瓊脂糖凝膠4B
貨號(hào) ：S8711
規(guī)格 ：100mL

產(chǎn)品 簡介 ：
    瓊脂糖凝膠4B是絲氨酸蛋白酶的廣譜抑制劑,，所以將這類物質(zhì)偶聯(lián)到瓊脂糖凝膠上，可以從各種來源的樣品中一步純化胰蛋白酶,、凝血酶、尿激酶,、激肽釋放酶,、前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶,。
    苯甲脒瓊脂糖凝膠由于應(yīng)用新的活化方法所以流速高， 非特異吸附少,， 而且填料粒度均勻，所以分離效果好,，是純化絲氨酸蛋白酶類適合的填料,。

親和填料 特征 ：

適用范圍 : 
    一步從各種樣品中純化絲氨酸蛋白酶類物質(zhì),。

應(yīng)用實(shí)例: 
實(shí)驗(yàn)名稱：苯甲脒瓊脂糖凝膠 FF分離尿激酶。

實(shí)驗(yàn)步驟：
   （1）苯甲脒瓊脂糖凝膠 FF裝柱,，1.6×20m，柱床體積為10ml
   （2）用緩沖液1平衡2-5個(gè)床體積,，流速為2ml/min
   （3）取尿激酶粗品200mg溶解在20ml的緩沖液1中，用0.45µm的濾膜過濾,，上樣,，流速
為1ml/min
   （4）用緩沖液1再洗2-5個(gè)床體積,，流速為2ml/min
   （5）后緩沖液2進(jìn)行洗脫，流速為2ml/min,，收集洗脫峰,，用SDS-PAGE純化后的效果,。
   （6）用純水洗5個(gè)柱床體積，然后分別用100mM,，pH8.0Tris-HCl緩沖液含1M NaCl和100mM,pH4.0的醋酸緩沖液含1M NaCl交替洗滌3次，再用純水洗3個(gè)柱床體積,，然后再用20%的乙醇流洗3個(gè)柱床體積,，流速為2ml/min,，柱子置于+4~8℃環(huán)境中保存。
   （7）色譜圖見圖1,，SDS-PAGE結(jié)果見圖2,。 緩沖液組成：
    緩沖液1：100mM pH7.4的PBS緩沖液,；緩沖液2：100mM醋酸緩沖液，pH4.0,。

也可以用這個(gè)填料特異去除各種融合蛋白酶切后的絲氨酸蛋白酶，例如凝血酶以及胰蛋
白酶類蛋白酶,。例如去除凝血酶上樣緩沖液為：50mM pH7.4的PBS緩沖液含0.15M NaCl,洗脫緩沖液為：50mM pH7.4的PBS緩沖液含1M NaCl,。

SDS-PAGE流程：
   （1）BSA法測(cè)量樣品蛋白濃度,；
   （2）根據(jù)測(cè)定樣品的蛋白濃度,，算出5-10µg/孔所需的體積；
   （3）向1.5ml EP管中加入含5-10µg蛋白的樣品溶液,，若體積小于10µL,，則加20mM PBSpH7.4補(bǔ)足10µl；若體積大于10µl,，則要加入1ml無水乙醇,，－20℃下濃縮1h,；
   （4）取濃縮樣品10000rpm離心15min，除去上清,，37℃烘箱10min去除殘余的乙醇；
   （5）在樣品加入20mM PBS pH7.4和2×loading buffer各10µl,，100℃下10min。取出后用冷卻30s,，4000rpm離心1s；
   （6）點(diǎn)樣,，電泳,。

應(yīng)用的注意事項(xiàng) ：
   1  色譜柱裝填
   1,、所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體好做脫氣處理,。
   2、在柱子下端加入蒸餾水,，以除去柱子中的空氣,，關(guān)閉柱子出口,，在柱內(nèi)保留少量的
蒸餾水。
   3,、將瓊脂糖凝膠連續(xù)倒入柱子時(shí),，要用玻璃棒的緊靠柱子內(nèi)壁引流,，以減少氣泡的產(chǎn)
生，讓填料先自然沉降,。
   4、柱壓不超過0.3MPa,，如果裝柱系統(tǒng)中無法測(cè)柱壓,，則控制流速高于300cm/h，但是在使用中一般只用大流速的75%,。
   2  蛋白的結(jié)合
   平衡緩沖液可以采用如下配方：100mM pH7.4的PBS緩沖液，0.1M NaCl,，pH8.0,。上樣完畢后,，繼續(xù)用平衡緩沖液洗柱子，直到基線平穩(wěn),。
   3  蛋白的洗脫
  （1）洗脫可以采取特異性或者非特異性洗脫,。
  （2）特異性洗脫可以用目標(biāo)分子的競爭劑,，對(duì)氨基苯甲脒的抑制劑。對(duì)非特異性洗脫
而言,，可以選用以下幾種方法：
   a 改變離子強(qiáng)度，通常加入1M的NaCl,，必要的話可以采用階段洗脫或線性梯度洗脫,。
   b 改變pH,，可采用階段洗脫洗脫或線性梯度洗脫來達(dá)到目的。
   c 降低洗脫緩沖液的極性,。如可以在洗脫緩沖液中加入10%的二氧六環(huán)等,。
   d 使用變性劑,。如在洗脫緩沖液中加入尿素、鹽酸胍等。

再生,、清洗: 
1  再生
   用純水洗5個(gè)柱床體積，然后分別用100mM,，pH8.0Tris-HCl緩沖液含1M NaCl和
100mM,pH4.0的醋酸緩沖液含1M NaCl交替洗滌3次,，再用水洗3個(gè)柱床體積,，然后再用20%的乙醇流洗3個(gè)柱床體積，流速為2ml/min,，柱子置于+4~8℃環(huán)境中,。
   如果在色譜操作過程中用到了變性劑或者去污劑,，也可以用上述方法洗柱子。
2  清洗
   在應(yīng)用中,，柱子上結(jié)合的一些物質(zhì)如變性蛋白和脂質(zhì)等不能通過再生過程去除,，這種
情況下，可以用去污劑如0.1%Triton X-100在37℃洗柱子1min,。之后立即用5個(gè)床體積的平衡液洗柱子,。

保存: 
    在20%乙醇中，4℃下長期保存,。

特別注意 ：
    上樣之前 ,， 樣品必須去除色素 ， 否則色素會(huì)被吸附到填料上 ,， 影響填料的正常使用

凝膠過濾填料 Sepharose 4B/瓊脂糖凝膠4B訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2,、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂,，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂,。 
3,、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化,，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn),。 
4,、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整,，因超過截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨,。
5,、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù),、底單等連同收貨人的地址,、姓名,、等以傳真、,、短信,、等形式通知我們,。

運(yùn)輸說明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸,。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒,，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞,，安全快速高效放心的送客戶的手中,，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,。
2,、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,，再使用泡沫盒密封,，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒,，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞,，安全快速高效放心的送客戶的手中,，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無需加冰或者特殊包裝,。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。