胚胎干細(xì)胞
免疫學(xué)法是較為常用的分離方法,它可選擇性地殺死囊胚外層的滋養(yǎng)層細(xì)胞,,而僅保留ICM,。它的原理是先將胚泡與抗小鼠的血清共同孵化一段時(shí)間后,然后加入補(bǔ)體,,在補(bǔ)體的作用下,,外層的滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生溶解,而ICM則不受影響,。
神經(jīng)干細(xì)胞
目前,,神經(jīng)干細(xì)胞的分離方法主要有三種:無(wú)血清培養(yǎng)基自然篩選法、流式細(xì)胞術(shù)分選法,、免疫磁珠分選法,。
無(wú)血清培養(yǎng)基自然篩選法是迄今應(yīng)用為廣泛,也是簡(jiǎn)單和容易操作且行之有效的方法,。其原理是利用特殊的培養(yǎng)基使成熟的神經(jīng)細(xì)胞無(wú)法較長(zhǎng)時(shí)間地成活,,而分離篩選出能夠在該培養(yǎng)條件下存活并繁殖的神經(jīng)干細(xì)胞群體。
步驟: (1)取胎腦,;
(2)用吸管吹吸使細(xì)胞分散均勻,;
(3)加小鼠神經(jīng)干*培養(yǎng)基培養(yǎng)。
脂肪間質(zhì)干細(xì)胞
分離培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞主要是通過(guò)膠原酶進(jìn)行消化,,獲得細(xì)胞懸液,。分離培養(yǎng)大鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞的大致步驟如下:
(1)取腹股溝處脂肪,,充分剪碎;
(2)加入膠原酶,,將其轉(zhuǎn)移離心管中進(jìn)行消化30分鐘,,加入培養(yǎng)基終止消化;
(3)離心,,大鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基重懸,,接種培養(yǎng)瓶中。
骨髓間質(zhì)干細(xì)胞
目前常用的分離MSC的方法有密度梯度離心法和全骨髓貼壁法,。全骨髓貼壁法的原理是根據(jù)間質(zhì)干細(xì)胞在低血清培養(yǎng)基中有貼壁優(yōu)勢(shì)特性,,定期換液除去不貼壁細(xì)胞,從而達(dá)到純化與擴(kuò)增間質(zhì)干細(xì)胞的目的,。
步驟 : (1)取大鼠股骨和脛骨,,以*培養(yǎng)基沖洗股骨和脛骨骨髓,轉(zhuǎn)移離心管中,,離心,,去上清;
(2)大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基重懸,,接種培養(yǎng),;
(3)原代培養(yǎng)36h全液量換液,去除未貼壁的造血細(xì)胞,,以后每3天換液一次,,直到細(xì)胞80-90融合傳代。
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