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中山大學(xué)的徐曉鵬博士向大家介紹了一種質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)免熱激及孵育的方法,。

背景：目前外源質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌的步驟，需要先將質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞在冰上撫育半小時(shí),，然后42度熱激90秒,，加液體培養(yǎng)基緩搖1個(gè)小時(shí)左右再離心涂板。其中熱激步驟溫度和時(shí)間要求嚴(yán)格,，熱激后大量菌細(xì)胞死亡,，還要經(jīng)過液體培養(yǎng)基撫育才能涂板。

方法改進(jìn)：我們可以在做質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞在冰上撫育的同時(shí),，將要涂的平板放在37度培養(yǎng)箱里,，當(dāng)撫育結(jié)束后，立即涂到已經(jīng)加熱到37度的平板上,，利用培養(yǎng)板的熱度代替熱激,，平板可以直接放回培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)。由于溫度相對溫和,，細(xì)胞死亡的少,，之后的液體培養(yǎng)基撫育過程也省掉了。

這個(gè)方法我們一直在用,，質(zhì)?？梢猿晒D(zhuǎn)進(jìn)菌體中，只要感受態(tài)細(xì)胞沒有問題,，其轉(zhuǎn)化率和使用熱激法差不多,，而且若是新鮮制備的感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化率甚更高,?？梢允∠?2度水浴裝置的儀器，還節(jié)省了少1個(gè)小時(shí)的時(shí)間。