分光光度計(jì)是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室*的好伙伴。它常用來測(cè)定生物樣品中的核酸,、蛋白和細(xì)胞,。這些樣品要么體積有限，要么濃度很高,，為分光光度法測(cè)定帶來了一定挑戰(zhàn),。當(dāng)然，技術(shù)在不斷發(fā)展,，讓微量樣品的測(cè)定成為現(xiàn)實(shí),。在分光光度計(jì)的使用過程中，有哪些需要注意的呢,？讓專家來告訴你,。
據(jù)介紹，分光光度計(jì)使用過程中的大問題往往在于用戶選擇了錯(cuò)誤的方法或錯(cuò)誤的比色皿,。而另一個(gè)問題在于純化的策略不對(duì),。用戶應(yīng)正確選擇分光光度計(jì)，并注意下面的一些問題,。
低體積 vs. 低濃度
我們先要了解樣品的特性,。有時(shí)，我們可能會(huì)混淆低體積和低濃度,，產(chǎn)生有問題的數(shù)據(jù),。這時(shí)，我們有必要回憶一下比爾-朗伯定律：當(dāng)一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時(shí),，其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度c及吸收介質(zhì)的厚度l成正比,。根據(jù)這一定律，當(dāng)吸收介質(zhì)厚度不變時(shí),，A與c之間應(yīng)該成正比,。而對(duì)于高濃度的樣品，應(yīng)使用較短的光程長(zhǎng)度進(jìn)行測(cè)定,。
樣品純度
樣品純度很重要,，這不僅僅關(guān)乎分光光度法測(cè)定，也涉及到其他的下游應(yīng)用,。樣品中的雜質(zhì)可能包括蛋白,、緩沖液組分，甚細(xì)胞,。你應(yīng)當(dāng)根據(jù)樣品量和濃度來選擇樣品制備策略,。各大廠家都提供選擇指南和操作手冊(cè)，教你如何選擇適合的產(chǎn)品,。此外,，要避免過濾柱的過載，以免產(chǎn)生不純的樣品洗脫液,。
選擇適當(dāng)?shù)谋壬?/span>
比色皿是光學(xué)透明的容器,，裝有分析溶液，將樣品引入光路中,。分析波長(zhǎng)在350 nm以上時(shí),，可選用玻璃或石英比色皿，在350 nm以下時(shí)須使用石英比色皿,，當(dāng)然,，現(xiàn)在也有一次性的塑料比色皿,。有些比色皿提供不同的光程長(zhǎng)度，如Eppendorf的UVettes,。它提供兩種不同的透光光徑：10 mm和2 mm,。通常濃度的樣品可以用10 mm光程長(zhǎng)度進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于高濃度的樣品,，只需將比色皿旋轉(zhuǎn)90°,，使用稍短的2 mm光徑進(jìn)行檢測(cè)。
在使用前一定要仔細(xì)檢查比色皿,，如果有刮花或油污,，或者上面有指紋，都會(huì)導(dǎo)致不準(zhǔn)確的測(cè)定結(jié)果,。目前市場(chǎng)上的有些分光光度計(jì)很靈活,，可以容納多種比色皿，包括微量比色皿,。這些微量比色皿使用微量的高濃度樣品,，特別適合生物分子（如核酸和蛋白）的測(cè)定。有些分光光度計(jì)是直接把樣品放在測(cè)量窗口上,，也十分方便,。
軟件要求
沒人想把時(shí)間花在儀器培訓(xùn)上。因此,，在您選擇分光光度計(jì)時(shí),，簡(jiǎn)單易用也是個(gè)重要的考量因素。即拆即用,，這當(dāng)然是美了,。數(shù)據(jù)管理和存儲(chǔ)也應(yīng)當(dāng)考慮。在有些情況下,，電源中斷或系統(tǒng)故障會(huì)導(dǎo)致數(shù)據(jù)損失,。如今有些儀器能直接連到電腦，而不需要額外的軟件或存儲(chǔ)設(shè)備,。
隨著技術(shù)的發(fā)展,，專為生物學(xué)應(yīng)用而開發(fā)的分光光度計(jì)在不斷涌現(xiàn)。相信我們的選擇會(huì)越來越多,，而儀器使用也會(huì)越來越簡(jiǎn)單,、方便、靈活,。
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