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FISH技術(shù)在慢性淋巴細(xì)胞性白血病中的應(yīng)用

閱讀:1674      發(fā)布時間:2013-6-3
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慢性淋巴細(xì)胞性白血?。?/span>chronic Lymphocytic leukemia,,CLL)是世界上常見的白血病種類,在中國發(fā)生率較低,,僅占慢性白血病的10%,。與其他白血病不同,不同CLL患者之間病情差別非常大,。因此,,對于CLL患者,如何在病情初期便對其疾病進(jìn)展情況,、治療有效性和生存期進(jìn)行準(zhǔn)確的預(yù)測顯得尤為重要,。
CLL的臨床分期主要包括RaiBinet分期法。這些方法依靠體格檢查和常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn),雖然也對患者的生存期做出一定的預(yù)測,,但并不準(zhǔn)確,,且無法對疾病的進(jìn)展、藥物治療的有效性等做出評估,。為了克服這個缺陷,,在常規(guī)臨床分期以外還有多種技術(shù)被采用以彌補(bǔ)其不足.
一:臨床分期方法的局限性
1. 80%患者均處于臨床早期階段
2. 無法預(yù)測疾病的進(jìn)展情況
3. 無法了解發(fā)病機(jī)制
4. 腫瘤負(fù)荷,如巨型淋巴結(jié)情況未被考慮
5. 無法預(yù)測資料有效性
: CLL預(yù)后判斷檢驗(yàn)方法
常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)
1. 臨床分析
2.骨髓浸潤程度分級
3.血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)
4.血淋巴細(xì)胞倍增時間生物標(biāo)志物檢驗(yàn)
1.細(xì)胞遺傳學(xué)(染色體條帶分析,、FISH
2.免疫球蛋白重鏈變異區(qū)(IgVH)突變
3.血清標(biāo)志物
在諸多新興的檢測方法中,,FISH技術(shù)以其準(zhǔn)確、方便,、客觀的優(yōu)勢得以脫穎而出,。
準(zhǔn)確FISH技術(shù)直接檢測特定基因的變化情況。正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞必然伴隨著內(nèi)部基因的變化,。且這種變化往往比相關(guān)蛋白的表達(dá),、臨床癥狀的變化都要早,因此檢測基因的變化情況能更好地對疾病進(jìn)展進(jìn)行預(yù)測,。
細(xì)胞中DNA的穩(wěn)定性要遠(yuǎn)高于蛋白質(zhì),,在樣品處理過程中不容易對DNA造成損傷而影響檢測結(jié)果,而蛋白質(zhì)的檢測就比較容易受到外界因素的影響,。例如IgVH突變狀態(tài)的主要標(biāo)志物之一CD-38的檢測就很容易受到時間因素的影響。
目前已利用了FISH技術(shù)對CLL患者的預(yù)后進(jìn)行多次回顧性實(shí)驗(yàn),,證明FISH的檢驗(yàn)結(jié)果與患者的疾病進(jìn)展,、治療的有效性、生存期長短密切相關(guān),,且與其它檢測指標(biāo),,如IgVH突變狀態(tài)具有較好的一致性,可作為CLL患者預(yù)后判斷的重要指標(biāo),。
方便在FISH技術(shù)開展以前,,主要使用染色體條帶技術(shù)對染色體變異情況進(jìn)行檢測。這種方法要求樣本為分裂期細(xì)胞,,而慢淋細(xì)胞在體外很難培養(yǎng)進(jìn)入分裂期,,只有40%左右的患者能檢測出染色體異常。FISH技術(shù)對樣本的要求相對寬松,,可直接對間期細(xì)胞進(jìn)行檢測,,檢出率可達(dá)染色體條帶技術(shù)的兩倍。
FISH技術(shù)目前已經(jīng)有一套相當(dāng)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)流程,,一般1-3個工作日即可提供檢驗(yàn)結(jié)果,,比計(jì)算淋巴細(xì)胞倍增時間或培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行染色體條帶分析大大節(jié)約時間。且操作難度低,不需要像使用ZAP70檢測IgVH突變那樣仔細(xì)分離細(xì)胞,。
客觀FISH檢測的結(jié)果以熒光信號計(jì)數(shù)為基礎(chǔ),,過程相對客觀,不同實(shí)驗(yàn)者之間的一致性好,,且結(jié)果的陰/陽性判斷有固定的標(biāo)準(zhǔn),,便于不同實(shí)驗(yàn)室直接比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果。而染色體條帶技術(shù)則主觀性較強(qiáng),,依賴于實(shí)驗(yàn)者的個人經(jīng)驗(yàn),;在使用CD-38ZAP70等替代性標(biāo)志物進(jìn)行IgVH突變狀態(tài)檢測時也缺乏統(tǒng)一的評判標(biāo)準(zhǔn),,導(dǎo)致不同實(shí)驗(yàn)室之間的檢查結(jié)果大相徑庭,。
“發(fā)現(xiàn)分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)(FISH)可以檢測到80%慢性淋巴細(xì)胞性白血病患者的染色體變異,(檢出率)差不多是染色體條帶技術(shù)的兩倍……”——Hartmut Dhoner et al. 新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志
常見生物標(biāo)志物檢測方法的優(yōu)缺點(diǎn),。
:常見生物標(biāo)志特檢測方法一覽表
 檢測原理主要檢測指標(biāo)優(yōu)點(diǎn)局限性
細(xì)胞遺傳學(xué)腫瘤細(xì)胞常伴有不同部位的基因突變,,導(dǎo)致染色體某些特定區(qū)域的缺失、易位或擴(kuò)增,。13q14.1缺失,、12染色體3體、ATM基因缺失,、p53基因缺失預(yù)后相關(guān)性好:可從發(fā)病機(jī)制上進(jìn)行研究,;提供客觀的評判標(biāo)準(zhǔn)。染色體條帶技術(shù)檢出率低,,FLSH技術(shù)有時無法獲得所需的探針,。
lgVHIgVH突變的細(xì)胞可能來源于生發(fā)中心后腫瘤,而未突變的細(xì)胞可能來源于生發(fā)中心腫瘤,。IgVH區(qū)基因,、CD38ZAP-70IgVH突變情況可作為患者生存期限預(yù)測的重要指標(biāo),。PCR檢測過于昂貴,;CD38ZAP-70不夠穩(wěn)定,且缺乏客觀的陽性判定指標(biāo),。
血清標(biāo)志物腫瘤細(xì)胞在生長過程中常伴有某些蛋白質(zhì)含量的變化,。CD23、胸腺嘧啶激酶,、β2小球蛋白與疾病的進(jìn)展相關(guān),;和淋巴細(xì)胞倍增時間β骨髓浸潤實(shí)驗(yàn)具有相關(guān)性。缺乏*的陽性判別標(biāo)準(zhǔn),,缺乏足夠的前瞻性研究證實(shí)其可靠性,。

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