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一、樣品的濃縮 (核酸蛋白檢測(cè)儀)
生物大分子在制備過(guò)程中由于過(guò)柱純化而樣品變得很稀,,為了保存和鑒定的目的,,往往需要進(jìn)行濃縮。常用的濃縮方法的:
減壓加溫蒸發(fā)濃縮
通過(guò)降低液面壓力使液體沸點(diǎn)降低,,減壓的真空度愈高,,液體沸點(diǎn)降得愈低,蒸發(fā)愈快,此法適用于一些不耐熱的生物大分子的濃縮,。
空氣流動(dòng)蒸發(fā)濃縮 空氣的流動(dòng)可使液體加速蒸發(fā),鋪成薄層的溶液,,表面不斷通過(guò)空氣流;或?qū)⑸锎蠓肿尤芤貉b入透析袋內(nèi)置于冷室,,用電扇對(duì)準(zhǔn)吹風(fēng),,使透過(guò)膜外的溶劑不沁蒸發(fā),而達(dá)到濃縮目的,,此法濃縮速度慢,,不適于大量溶液的濃縮。
冰凍法 生物大分子在低溫結(jié)成冰,,鹽類及生物大分子不進(jìn)入冰內(nèi)而留在液相中,,操作時(shí)先將待濃縮的溶液冷卻使之變成固體,然后緩慢地融解,,利用溶劑與溶質(zhì)融點(diǎn)介點(diǎn)的差別而達(dá)到除去大部分溶劑的目的,。如蛋白質(zhì)和酶的鹽溶液用此法濃縮時(shí),不含蛋白質(zhì)和酶的純冰結(jié)晶浮于液面,,蛋白質(zhì)和酶則集中于下層溶液中,,移去上層冰塊,可得蛋白質(zhì)和酶的濃縮液,。
吸收法 通過(guò)吸收劑直接收除去溶液中溶液分子使之濃縮,。所用的吸收劑必需與溶液不起化學(xué)反應(yīng),對(duì)生物大分子不吸附,,易與溶液分開,。常用的吸收劑有聚乙二醇,聚乙稀吡咯酮,、蔗糖和凝膠等,,使用聚乙二醇吸收劑時(shí),先將生物大分子溶液裝入半透膜的袋里,,外加聚乙二醇復(fù)蓋置于4度下,,袋內(nèi)溶劑滲出即被聚乙二醇迅速吸去,聚乙二醇被水飽和后要更換新的直至達(dá)到所需要的體積,。
超濾法 超濾法是使用一種特別的薄膜對(duì)溶液中各種溶質(zhì)分子進(jìn)行選擇性過(guò)濾的方法,,不液體在一定壓力下(氮?dú)鈮夯蛘婵毡脡海┩ㄟ^(guò)膜時(shí),溶劑和小分子透過(guò),,大分子受阻保留,,這是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的新方法,zui適于生物大分子尤其是蛋白質(zhì)和酶的濃縮或脫鹽,,并具有成本低,,操作方便,,條件溫和,能較好地保持生物大分子的活性,,回收率高等優(yōu)點(diǎn),。應(yīng)用超濾法關(guān)鍵在于膜的選擇,不同類型和規(guī)格的膜,,水的流速,,分子量截止值(即大體上能被膜保留分子zui小分子量值)等參數(shù)均不同,必須根據(jù)工作需要來(lái)選用,。另外,,超濾裝置形式,溶質(zhì)成份及性質(zhì),、溶液濃度等都對(duì)超濾效果的一定影響,。Diaflo 超濾膜的分子量截留值
膜名稱
分子量截留值
孔的大的平均直徑
用上面的超濾膜制成空心的纖維管,將很多根這樣的管攏成一束,,管的兩端與低離子強(qiáng)度的緩沖液相連,,使緩沖液不斷地在管中流動(dòng)。然后將纖維管浸入待透析的蛋白質(zhì)溶液中,。當(dāng)緩沖液流過(guò)纖維管時(shí),,則小分子很易透過(guò)膜而擴(kuò)散,大分子則不能,。這就是纖維過(guò)濾秀析法,,由于透析面積增大,,因而使透析時(shí)間縮短10倍,。
二、干燥(核酸蛋白檢測(cè)儀)
生物大分子制備得到產(chǎn)品,,為防止變質(zhì),,易于保存,常需要干燥處理,,zui常用的方法是冷凍干燥和真空干燥,。真空干燥適用于不耐高溫,易于氧化物質(zhì)的干燥和保存,,整個(gè)裝置包括干燥器,、冷凝器及真空干燥原理外,同時(shí)增加了溫度因素,。在相同壓力下,,水蒸汽壓隨溫度下降而下降,故在低溫低壓下,,冰很易升華為氣體,。操作時(shí)一般先將待干燥的液體冷凍到冰點(diǎn)以下使之變成固體,,然后在低溫低壓下將溶劑變成氣體而除去。此法干后的產(chǎn)品具有疏松,、溶解度好,、保持天然結(jié)構(gòu)等優(yōu)點(diǎn),適用于各類生物大分子的干燥保存,。
三,、貯存(核酸蛋白檢測(cè)儀)
生物大分子的穩(wěn)定性與保存方法的很大關(guān)系。干燥的制品一般比較穩(wěn)定,,在低溫情況下其活性可在數(shù)日甚至數(shù)年無(wú)明顯變化,,貯藏要求簡(jiǎn)單,只要將干燥的樣品置于干燥器內(nèi)(內(nèi)裝有干燥劑)密封,,保持0-4度冰箱即可,,液態(tài)貯藏時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)。
樣品不能太稀,,必須濃縮到一定濃度才能封裝貯藏,,樣品太稀易使生物大分子變性。
一般需加入防腐劑和穩(wěn)定劑,,常用的防腐劑有甲苯,、苯甲酸、氯仿,、百里酚等,。蛋白質(zhì)和酶常用的穩(wěn)定劑有硫酸銨糊、蔗糖,、甘油等,,如酶也可加入底物和輔酶以提高其穩(wěn)定性。此外,,鈣,、鋅、硼酸等溶液對(duì)某些酶也有一定保護(hù)作用,。核酸大分子一般保存在氯化鈉或檸檬酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中,。
貯藏溫度要求低,大多數(shù)在0度左右冰箱保存,,有的則要求更低,,應(yīng)視不同物質(zhì)而定。
文章關(guān)鍵詞:核酸蛋白檢測(cè)儀,,蛋白質(zhì)
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