熒光定量PCR反應(yīng)就是從RNA反轉(zhuǎn)錄至cDNA，然后通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增cDNA的過程,。Super一步法RT-PCR(AMV)試劑盒采用了一步反應(yīng)法完成整個RT-PCR反應(yīng),，即RNA-cDNA-PCR反應(yīng)操作在同一反應(yīng)體系中進(jìn)行，反應(yīng)過程中不需增加額外的步驟,，就可完成整個RT-PCR反應(yīng),，同時整個反應(yīng)系統(tǒng)且含有電泳時所需要的試劑，可直接上樣電泳,。本試劑盒具有方便、簡捷,、靈敏度高,、重復(fù)性好的特點(diǎn)，可適用于各種動,、植物,、病毒RNA的PCR檢測。
熒光定量PCR使用注意事項(xiàng)：
1.平臺效應(yīng)：PCR不能進(jìn)入平臺期,，出現(xiàn)平臺效應(yīng)與所擴(kuò)增的目的基因的長度,、序列、二級結(jié)構(gòu)以及目標(biāo)DNA起始的數(shù)量有關(guān),。故對于每一個目標(biāo)序列出現(xiàn)平臺效應(yīng)的循環(huán)數(shù),，均應(yīng)通過單獨(dú)實(shí)驗(yàn)來確定。
2.防止DNA的污染：①采用DNA酶處理RNA樣品,；②在可能的情況下,，將PCR引物置于基因的不同外顯子，以消除基因和mRNA的共線性,。
3.RNA提取試劑盒：目前試劑公司有多種RNA提取試劑盒,、cDNA試劑盒,、PCR試劑盒以及RT-PCR試劑盒出售，其原理基本相同,，但操作步驟不一,。如果使用試劑盒，具體操作步驟請參照試劑盒說明書,。
熒光定量PCR的使用方法和用途：
1.支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒(一步法)
1)適合科研單位檢測,，或單位內(nèi)檢，用PCR法檢測細(xì)胞或其他生物基質(zhì),。
2) 比藥典操作標(biāo)準(zhǔn)合并了一步,，(將內(nèi)控對照試劑預(yù)先混合在PCR mix試劑中)，操作更簡潔,。
3)樣本量為2μl,，靈敏度為20個基因組拷貝/反應(yīng)。結(jié)果準(zhǔn)確,。
2.支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒(經(jīng)典法,，不含Taq酶)
1) 符合歐洲藥典、中國藥典要求,，更適合細(xì)胞治療,，CAR-T，抗體藥,、疫苗等臨床項(xiàng)目申報和質(zhì)檢,。
2)樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl,。
3)試劑盒中不含Taq酶,，需另外購買。
4) 廠家可協(xié)助完善方法驗(yàn)證步驟,。
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