雙槽梯度PCR儀通常有12種溫度梯度,，這樣的儀器就叫梯度PCR儀。因為被擴(kuò)增的不同DNA片段,，其退火溫度是不同的,，通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增，從而一次性PCR擴(kuò)增,，就可以篩選出表達(dá)量高的退火溫度,，進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,，這樣節(jié)約成本的同時也節(jié)約了時間,。主要用于科研，教學(xué)機(jī)構(gòu),。梯度PCR儀,，在不設(shè)置梯度的情況下也可以做普通PCR擴(kuò)增。具有雙槽梯度的不多,，領(lǐng)成具備此功能,。
雙槽梯度PCR儀增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機(jī)分析處理系統(tǒng)，就成了熒光定量PCR儀,。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同,，只是PCR擴(kuò)增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,，使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增,。擴(kuò)增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實時結(jié)果輸出。把這PCR儀叫做實時二手熱循環(huán)儀PCR儀(qPCR儀),。熒光定量PCR儀有單通道,，雙通道，和多通道,。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時候,，選用單通道，有多熒光標(biāo)記的時候用多通道,。單通道也可以檢測多熒光的標(biāo)記的目的基因表達(dá)產(chǎn)物,，因為一次只能檢測一種目的基因的擴(kuò)增量，需多次擴(kuò)增才能檢測完不同的目的基因片段的量,。
雙槽梯度PCR儀該怎樣設(shè)置梯度,？
一般別的的步驟和普通PCR都一樣,，不同在于復(fù)性溫度的設(shè)置，多數(shù)是先設(shè)定一個復(fù)性溫度的范圍,，然后是該范圍內(nèi)的梯度數(shù),，(有的還有0.5和0.2微升EP管之分)，PCR儀會很據(jù)這兩個數(shù)據(jù)給出每個梯度數(shù)的具體溫度,，然后你根據(jù)這些溫度選擇接近你所希望的復(fù)性溫度較接近的溫度所在的孔的位置,，將ep管插入這些孔即可。
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