迷你梯度PCR儀的性能對(duì)于您和您的研究具有至關(guān)重要的作用,。溫度,、變溫速率和保持時(shí)間是影響PCR反應(yīng)成功的關(guān)鍵參數(shù),。高性能PCR儀必須能夠準(zhǔn)確控制液體(反應(yīng))溫度和保持時(shí)間,不受反應(yīng)體積的影響,。PCR儀對(duì)溫度和保持時(shí)間的控制在PCR優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中具有更重要的作用,。PCR儀必須在正常PCR和PCR優(yōu)化運(yùn)行過(guò)程中提供相同的性能。梯度溫度控制是幫助用戶進(jìn)行PCR優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的特性之一,,以便確定PCR實(shí)驗(yàn)方案的溫度和保持時(shí)間,,盡量減少實(shí)驗(yàn)次數(shù)。在理論上,,真正的梯度應(yīng)在均勻的金屬加熱模塊上顯示線性溫度斜率,。
迷你梯度PCR儀實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng):
1.戴一次性手套,若不小心濺上反應(yīng)液,,立即更換手套,;
2.使用一次性吸頭,嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,,吸頭不要長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中,,避免氣溶膠的污染,;
3.避免反應(yīng)液飛濺,,打開(kāi)反應(yīng)管時(shí)為避免此種情況,開(kāi)蓋前稍離心收集液體于管底,。若不小心濺到手套或桌面上,,應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
4.操作多份樣品時(shí),,制備反應(yīng)混合液,,先將dNTP、緩沖液,、引物和酶混合好,,然后分裝,這樣即可以減少操作,,避免污染,,又可以增加反應(yīng)的準(zhǔn)確度;
5.加入反應(yīng)模板,,加入后蓋緊反應(yīng)管,;
6.操作時(shí)設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照和空白對(duì)照,即可驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性,,又可以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性,;
7.盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染,,建議使用可替換或高壓處理的加樣器,。如沒(méi)有這種特殊的加樣器,,至少PCR操作過(guò)程中加樣器應(yīng)該專用,不能交叉使用,,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)區(qū),;
8.重復(fù)實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證結(jié)果,,慎下結(jié)論,。
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