（一）、儀器設(shè)備
1）18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫(yī)用微波爐,；
2）水浴鍋
（二）,、試劑
1）PBS緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L,，Na2HPO4 4.3mmol/L,， KH2PO4 1.4mmol/L。
2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（CB,，pH6.0,，1000ml）：檸檬酸三鈉 3g，檸檬酸 0.4g,。
3）0.5mol/L EDTA緩沖液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA•2H2O,，用10 mmol/L NaOH調(diào)至pH8.0,加水至1000ml。
4）1mol/L的TBS緩沖液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris堿,，用1N的HCl調(diào)至pH8.0,加水至1000ml,。
5）酶消化液： a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2（pH7.8） 配制,。 b,、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。
6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制,。
7）封裱劑：
a,、甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩沖液（pH9.0～9.5）等量混合；
b,、油和TBS（或PBS）配制,。
8）TBS/PBS pH9.0～9.5，適用于熒光顯微鏡標(biāo)本,；pH7.0～7.4適合于光學(xué)顯微鏡標(biāo)本,。
（三）,、操作流程
1、脫蠟和水化
脫蠟前,，應(yīng)將組織芯片在室溫中放置60分鐘或60℃恒溫箱中烘烤20分鐘,。
1）組織芯片置于二甲苯中浸泡10分鐘，更換二甲苯后再浸泡10分鐘,；
2）無水乙醇中浸泡5分鐘,；
3）95%乙醇中浸泡5分鐘；
4）70%乙醇中浸泡5分鐘,；
2,、抗原修復(fù)
用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片。
1）抗原熱修復(fù)
（1）高壓熱修復(fù)在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0）,。蓋上不銹鋼高壓鍋的蓋子,，但不進(jìn)行鎖定。將玻片置于金屬染色架上,，緩慢加壓,，使玻片在緩沖液中浸泡5分鐘，然后將蓋子鎖定,，小閥門將會升起來,。10分鐘后，去除熱源,，置入涼水中,，當(dāng)小閥門沉下去后打開蓋子。本方法適用于較難檢測或核抗原的抗原修復(fù),。
（2）煮沸熱修復(fù)電爐或者水浴鍋加熱0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0）至95℃左右,，放入組織芯片加熱10~15分鐘。
（3）微波熱修復(fù)在微波爐里加熱0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0）至沸騰后將組織芯片放入,，斷電,，間隔5~10分鐘，反復(fù)1-2次,。適用的抗原有：AR,，Bax，Bcl-2,，C-fos,，X-jun,，C-kit,，C-myc，E-cadherin,，Chromogranin A,，Cyclin,，ER，Heat shock protein,，HPV,，Ki-67，MDMZ,，p53,，p34，p16,，p15,，P-glycoprotein，PKC,，PR,，PCNA，ras,，Rb,，TopoismeraseⅡ等。
2）酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液,。胰蛋白酶使用前預(yù)熱至37℃,，切片也預(yù)熱至37℃，消化時間約為5~30分鐘,；胃蛋白酶消化37℃時間為30分鐘,。適用于被固定遮避的抗原，其中有：Collagen,，Complement,，Cytokeratin，C-erB-2,，GFAP,，LCA，LN等,。
3,、免疫組織化學(xué)染色
SP法
1）脫蠟、水化,；
2）PBS洗2～3次各5分鐘,；
3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室溫靜置10分鐘,；
4）PBS洗2～3次各5分鐘,；
5）抗原修復(fù)；
6）PBS洗2～3次各5分鐘,；
7）滴加正常山羊血清封閉液,室溫20分鐘,。甩去多余液體,。
8）滴加Ⅰ抗50μl，室溫靜置1小時或者4℃過夜或者37℃1小時,。
9）4℃過夜后需在37℃復(fù)溫45分鐘,。
10）PBS洗3次各5分鐘；
11）滴加Ⅱ抗40～50μl,，室溫靜置,，或37℃1小時；
12）II抗中可加入0.05%的tween-20,。
13）PBS洗3次各5分鐘,；
14）DAB顯色5～10分鐘，在顯微鏡下掌握染色程度,；
15）PBS或自來水沖洗10分鐘,；
16）蘇木精復(fù)染2分鐘，鹽酸酒精分化,；
17）自來水沖洗10～15分鐘,；
18）脫水、透明,、封片,、鏡檢。
SABC法
1）脫蠟,、水化,。
2）PBS洗兩次各5分鐘。
3）用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2,，室溫封閉5～10分鐘,，蒸餾水洗3次。
4）抗原修復(fù),。
5）PBS洗5分鐘,。
6）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘,。甩去多余液體,。
7）滴加Ⅰ抗,室溫1小時或者4℃過夜或者37℃1小時（4℃過夜后在37℃復(fù)溫45分鐘）。
8）PBS洗三次每次2分鐘,。
9）滴加生物素化二抗,20℃～37℃20分鐘,。
10）PBC洗3次每次2分鐘。
11）滴加試劑SABC,，20℃～37℃20分鐘,。
12）PBS洗4次每次5分鐘。
13）DAB顯色：DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色（鏡下掌握顯色程度）。
14）蒸餾水洗,。蘇木素復(fù)染2分鐘、鹽酸酒精分化,。
15）脫水,、透明、封片,、鏡檢,。