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中級(jí)會(huì)員 | 第16年

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如何從脂肪組織中提取總蛋白?

時(shí)間:2024/6/3閱讀:584
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    從培養(yǎng)的細(xì)胞和組織中提取總蛋白是實(shí)驗(yàn)室非常常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)步驟,,從大多數(shù)類型的細(xì)胞和組織中提取總蛋白比較容易,,但是從脂肪組織中提取高質(zhì)量和高濃度蛋白質(zhì)是非常困難的,。脂肪組織有白色和棕色脂肪兩種類型,被稱為白色脂肪組織(WAT)和棕色脂肪組織(BAT),。脂肪組織中含有許多脂滴,,蛋白質(zhì)含量小于細(xì)胞總數(shù)的 2%。低蛋白含量使得從脂肪中分離高濃度蛋白挑戰(zhàn)性,。以下是幾種從脂肪組織中提取蛋白的方法:
 
A.RIPA 緩沖液提取法:
   脂肪組織通過(guò)含有表面活性劑的緩沖液(例如 RIPA 緩沖液)勻漿,,離心后,收集脂肪層下的液體組分為蛋白質(zhì),,這種方法是相對(duì)簡(jiǎn)單的,,但是蛋白質(zhì)的產(chǎn)量非常低,因?yàn)楸砻婊钚詣┙?jīng)常導(dǎo)致蛋白質(zhì)形成微小顆粒導(dǎo)致蛋白丟失,。
 
B. 有機(jī)溶劑萃取 TCA 沉淀法:
    有以下三種方法:1)脂肪組織通過(guò)蔗糖密度梯度離心,,丙酮中加入三***(TCA)-20℃ 過(guò)夜沉淀蛋白。2)脂肪組織用有機(jī)溶劑提取液裂解(CHCl3和甲醇的混合物),,也如上用 TCA 沉淀,。3)脂肪組織用有機(jī)溶劑提取液(TEF 和CHCl3勻漿,通過(guò)離心將水相和CHCl3相分離,,將其上的水相和交界面去除,,并通過(guò)離心蒸發(fā)干燥。以上三種方法的共同問(wèn)題是操作繁瑣,,產(chǎn)量低,。
 
C. 離心管柱提取法:
    這種方法利用了一種新的蛋白質(zhì)提取技術(shù),脂肪組織通過(guò)無(wú)表面活性劑的緩沖液勻漿,,水油乳狀液通過(guò)簡(jiǎn)單的冷凍后,,離心使其通過(guò)特殊的離心管柱(有孔徑,表面性質(zhì)被處理過(guò)的)提取,。離心管柱的作用是快速,,干凈的從油相中分離出水相蛋白。Invent Biotechnologies Inc 公司利用技術(shù)生產(chǎn)的這種脂肪蛋白提取試劑盒可以從脂肪組織中提取全部的總蛋白,,產(chǎn)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他方法,。

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