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當前位置:上海一基實業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>抗血清制備必須注意的問題
抗血清為含有某一類具有特異免疫功能的抗體分子的血清,一般為動物被人工注射某類抗原后制備的動物血清。價的抗血清用于研究工作以及疾病的診斷和治療,。
一種抗原能否引起抗體反應(yīng),一方面取決于抗原分子表面有無抗原決定簇(Antigenic
determinant),,另一方面取決于機體的免疫狀態(tài),,當具備以上兩個條件后,抗體將遵循抗體的一般規(guī)律——初次反應(yīng)和再次反應(yīng),。
抗原的種類繁多,,包括天然的蛋白質(zhì)抗原和細胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等,,不同的抗原免疫動物具有不同的特殊性,。一般*抗原免疫動物需加用佐劑,尤其在使用可溶性抗原時,,以期得到價的抗血清,;合成性抗原和基因工程抗原等半抗原物質(zhì)需先通過人工的方法與蛋白質(zhì)載體連接后再與佐劑混合免疫動物,方可獲得理想的免疫效果,。使用佐劑后可增加抗原的免疫原性和延長抗原在機體內(nèi)存留的時間,,從而改變了抗原原有的免疫原性。
其注意事項有如下幾點:
1,、動物的免疫反應(yīng)存在著個體差異,,甚至有人報告不同品種動物一次免疫后產(chǎn)生的抗體的差別可高達500倍,所以制備抗血清時不能只免疫一只動物,,一般免疫3~4只,,因為有的動物可能產(chǎn)生抗體效價很低或不產(chǎn)生抗體,免疫反應(yīng)好的動物所能提供的抗體往往高于一般動物3~4倍,。
2,、制成的抗原乳劑是否為油包水乳劑應(yīng)進行檢查,,否則會影響免疫效果,如不是油包水乳劑,,應(yīng)重新制備,。
3、要制備價的抗體,,必須要加佐劑(一般采用*福氏佐劑),,加佐劑后免疫動物,抗體效價至少可增加5倍,。但也應(yīng)考慮到,,如果抗原中有微量的雜蛋白存在,即使0.005mg,,亦可因有佐劑而產(chǎn)生非特異性的抗體,,所以要根據(jù)實驗需要和抗原的純度適當?shù)厥褂米魟?/span>
4、分裝保存的抗血清應(yīng)注明抗血清的名稱,,效價,,制備日期以及包裝量。
5,、當抗原量過少不易提純時,,可采用抗原抗體在瓊脂擴散中形成的沉淀線直接免疫動物制備抗體。
6,、抗血清效價一般以抗血清稀釋倍數(shù)表示,。血清效價的檢測方法很多,靈敏度各不同,,因此在表示抗血清效價時,,應(yīng)標明檢測方法。另外,,在沉淀反應(yīng)中,,出現(xiàn)沉淀時的抗原、抗體比例有一較大的范圍,,如用不同濃度的抗原測定效價時,,結(jié)果會因此有別,,所以在測定抗血清效價時,,需注意抗原的濃度。
7,、為制備單價特異性高的抗血清,,所用抗原純度越高越好,因此,,在純化抗原過程中應(yīng)盡量除去可能存在的雜蛋白,,這樣可以省去許多時間來吸收抗血清中的非特異性抗體,。
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