D-熒光素鉀鹽是螢火蟲(chóng)熒光素酶底物

D-熒光素（ D-Luciferin）是螢火蟲(chóng)熒光素酶底物,，其量子效率為 0.88，是魯米諾（Luminol）的 20 倍,。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶 （Luciferase）的常用底物,，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,，特別是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在 ATP 和熒光素酶的作用下,，熒光素（底 物）能夠被氧化發(fā)光,。當(dāng)熒光素過(guò)量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性,。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞 后,，導(dǎo)入研究動(dòng)物如大、小鼠體內(nèi),，之后注入熒光素,，通過(guò)生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來(lái)檢測(cè)光強(qiáng)度變化，從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物 的治療功效等,。也可以利用 ATP 對(duì)此反應(yīng)體系的影響,，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)指示能量或生命體征。D-熒光素也常用于體外研究,，包括 熒光素酶和 ATP 水平分析,；報(bào)告基因分析；高通量測(cè)序和各種污染檢測(cè),。 

使用方法

1. 活體成像分析方法 

A：用 DPBS（w/o Mg2+,、Ca2+）配置 D-Luciferin 工作液（15mg/mL），0.2 μm 濾膜 無(wú)菌過(guò)濾,。立即使用,，或 分裝-20℃保存。 

B：注射量：10μL/g 的體重,，如 10g 重小鼠,，注射 100μL 工作液（1.5mg D-Luciferin）。 

C：腹腔注射 10～15 分鐘后,，上機(jī)進(jìn)行圖像分析,。

 *建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力曲線(xiàn)，從而確定高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期,。

2. 體外分析方法 A：用無(wú)菌水配置 200×的 D-Luciferin 儲(chǔ)備液（30mg/mL）,，立即使用，或分裝-20℃保存,。 

B：用預(yù)熱好的*培養(yǎng)基稀釋 D-Luciferin 儲(chǔ)備液,，配置工作液（150μg/mL）。 

C：去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基,。 

D：進(jìn)行圖像分析前,，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育 5-10 min，進(jìn)行圖像分析,。