水質(zhì)微生物檢驗(yàn)生活用水糞鏈球菌檢測(cè)板1  原理及適用范圍

糞鏈球菌普遍存在于水環(huán)境中,，為條件致病菌，它來(lái)源于人和溫血?jiǎng)游锏募S便,，可以在水中存活很長(zhǎng)時(shí)間,，引起人類(lèi)疾病。是水體受到糞便污染的重要指標(biāo)菌,，更能客觀的反映水質(zhì)衛(wèi)生狀況,。中華人民共和國(guó)城鎮(zhèn)建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)在對(duì)城市供水、飲用水水質(zhì)監(jiān)測(cè)中增加了水中糞鏈球菌的檢測(cè)指標(biāo),。糞鏈球菌檢測(cè)板是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品,，含有標(biāo)準(zhǔn)的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC）,，菌落在檢測(cè)板上呈紅色帶黃暈斑點(diǎn),。本產(chǎn)品適合于生活飲用水、生產(chǎn)加工用水及食品中糞鏈球菌的測(cè)定,。執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》（GB/T 8538）,；《中華人民共和國(guó)城鎮(zhèn)建設(shè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》（CJ/T 141～150）；《中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》（SN/T 1933.1）,。  

2  操作方法

2.1 水樣品檢測(cè)

2.1.1 水樣過(guò)濾：將滅菌的過(guò)濾裝置連接到抽濾瓶上,，用滅菌鑷子夾取直徑47 mm～50 mm，孔徑為0.45μm的滅菌濾膜,，放在濾器底部,，旋緊蓋子，將250 mL水樣注入濾器中抽濾,。

2.1.2 揭開(kāi)水質(zhì)微生物檢驗(yàn)生活用水糞鏈球菌檢測(cè)板檢測(cè)板上層膜,，在檢測(cè)板紙片上加1 mL無(wú)菌水濕潤(rùn)后,，迅速用無(wú)菌鑷子將過(guò)濾水樣的濾膜移放在檢測(cè)板紙片上（濾膜截留細(xì)菌面向上），濾膜與紙片之間不要夾留著氣泡,，貼好上層膜,。

2.2 食品樣品檢測(cè)

2.2.1 取25 g（或25 mL）樣品放入裝有225 mL生理鹽水的均質(zhì)袋中，以8000 r/min均質(zhì)1～2 min,，制成1:10樣品均液,，根據(jù)樣品污染程度及檢驗(yàn)需要，可進(jìn)一步制成10倍遞增的樣品稀釋液,。

2.2.2 將糞鏈球菌檢測(cè)板上層膜不干膠標(biāo)簽部分揭開(kāi),，用無(wú)菌吸管吸取1 mL樣品稀釋液均勻滴加到紙片上，迅速貼好上層膜并水平晃動(dòng)檢測(cè)板,，靜置10 s左右,，待樣品稀釋液*被吸附在濾紙上。每個(gè)稀釋度接種兩個(gè)檢測(cè)板作為重復(fù),。

2.3 培養(yǎng)：將水質(zhì)微生物檢驗(yàn)生活用水糞鏈球菌檢測(cè)板檢測(cè)板疊在一起,，倒置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，36℃±1℃,，培養(yǎng)15～24 h,。

3  結(jié)果判讀

在檢測(cè)板（濾膜）上生長(zhǎng)的紅色帶黃暈的斑點(diǎn)即為糞鏈球菌陽(yáng)性，若紙片上的紅色斑點(diǎn)無(wú)黃暈則為糞鏈球菌陰性,。

4  計(jì)數(shù)原則及報(bào)告方式

4.1  濾膜過(guò)濾水樣：以濾過(guò)一張無(wú)菌濾膜后產(chǎn)生的菌落數(shù)計(jì)算,，選擇菌落數(shù)在20～100CFU的檢測(cè)板進(jìn)行計(jì)數(shù)后即為250 mL水樣品中所含的菌落總數(shù)。結(jié)果以CFU/250 mL為單位報(bào)告,。

4.2 食品樣品計(jì)數(shù)

4.2.1 以生長(zhǎng)有30～300CFU的檢測(cè)板為計(jì)數(shù)適宜范圍,。

4.2.2 若只有一個(gè)稀釋度檢測(cè)板上的菌落數(shù)在計(jì)數(shù)合適范圍30～300CFU之間，則計(jì)算兩個(gè)檢測(cè)板菌落數(shù)的平均值,，再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),，作為每克（毫升）中菌落總數(shù)結(jié)果。

4.2.3 若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí),，按式（1）計(jì)算：

                        ∑C

               N= ————————     •••••••••••••••••••（1）

                   （n1+0.1n2）d

   式中：

   N——樣品中糞鏈球菌菌落數(shù),；

   ∑C——兩個(gè)連續(xù)稀釋度檢測(cè)板（含適宜范圍菌落數(shù)的檢測(cè)板）糞鏈球菌菌落之和；

   n1——適宜范圍菌落數(shù)的*個(gè)稀釋度（低）檢測(cè)板個(gè)數(shù)

   n2——適宜范圍菌落數(shù)的第二個(gè)稀釋度（高）檢測(cè)板個(gè)數(shù)

   d——*稀釋度的稀釋倍數(shù)

 示例：

4.2.4 若所有稀釋度檢測(cè)板上均無(wú)菌落生長(zhǎng),，則以小于1/d（d—最低稀釋倍數(shù)）計(jì)算,。

4.2.5 低數(shù)值的估算：如果實(shí)驗(yàn)樣品原液（水及液體飲料）或初始稀釋?xiě)乙海ㄆ渌麡悠罚┑膬蓚€(gè)檢測(cè)板上的菌落數(shù)均小于30CFU，計(jì)算兩個(gè)檢測(cè)板上的菌落數(shù)的平均數(shù),。計(jì)算式（2）：

                    ∑C

                  NE = ——    •••••••••••••••••••（2）

                        nd

式中：

NE——每毫升或每克樣品中菌數(shù)的估算值,；

∑C——兩個(gè)檢測(cè)板上菌落數(shù)的和；

n——檢測(cè)板的數(shù)量,；

d——樣品初始懸液或?qū)嶋H接種懸液的稀釋倍數(shù),。

4.2.6 大數(shù)值的估算：若所有稀釋度的檢測(cè)板上菌落數(shù)均大于300CFU,，計(jì)數(shù)較接近300CFU的檢測(cè)板上的菌落并計(jì)算出平均數(shù)，其他檢測(cè)板可記錄為多不可計(jì),。結(jié)果計(jì)算式（3）：

                        ∑C

                  NE = ——   •••••••••••••••••••（3）

                        nd

式中：

NE——每毫升或每克樣品中菌數(shù)的估算值,；

∑C——兩個(gè)檢測(cè)板上菌落數(shù)之和；

n——檢測(cè)板的數(shù)量,；

d——與樣品懸液相*的稀釋倍數(shù),。

5  結(jié)果報(bào)告

固體樣品以CFU/g為單位報(bào)告，液體樣品以CFU/mL為單位報(bào)告,。

6  附加說(shuō)明

    注意使用過(guò)的檢測(cè)板上帶有活菌,，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理,。