綠洲生化水質糞大腸菌群測試片水源水污水

BD105Ⅰ 水質（糞）大腸菌群快速檢驗紙片 1份/包 適用于湖水,、水源水中大腸菌群的快速檢測,。

BD105Ⅱ 水質（糞）大腸菌群快速檢驗紙片 1份/包 適用于河水、生活用水,、醫(yī)療機構處理后排污水,、禽畜養(yǎng)殖業(yè)等排放廢水中大腸菌群的快速檢測。

分BD105Ⅰ和BD105Ⅱ兩個型號,，請注意選擇型號,。

綠洲生化水質糞大腸菌群測試片水源水污水

1、適用范圍 水質（糞）大腸菌群的測定 紙片快速法

本標準適用于地表水,、生活污水,、醫(yī)療機構及禽畜養(yǎng)殖業(yè)等其他行業(yè)排放的廢水中（糞）大腸菌群的快速篩查。

本方法的檢出限為20MPN/L,。

2,、規(guī)范性引用文件

本標準內容引用了下列文件或其中的條款。凡是不注明日期的引用文件,，其有效版本適用于本標準,。HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術規(guī)范

3、術語和定義

下列術語和定義適用于本標準,。

3.1總大腸菌群（total coliforms）

在37℃培養(yǎng),，24h內能發(fā)酵乳糖酸產氣的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。

3.2 糞大腸菌群（fecal coliforms）

44.5℃培養(yǎng),，24h內能發(fā)酵乳糖產酸氣的總大腸菌群,，屬糞行來源，稱為糞大腸菌群,。

4,、方法原理

將一定量的乳糖、指示劑（溴甲酚紫和2,，3, 5-氯化三苯基四氮唑即TTC）以及營養(yǎng)成分等吸附于一定面積的無菌濾紙上,，當細菌生長繁殖時，產酸使PH值降低,，溴甲酚紫指示劑由紫色變黃色。同時,，產氣過程相應的脫氫酶在適宜的PH范圍內,，催化底物脫氫還原TTC形成紅色的不溶性三苯甲臜（TTF），即可在產酸后的黃色背景下顯示出紅色斑點（或紅暈）,。通過上述指示劑的顏色變化就可對是否產酸產氣作出判斷,，從而確定是否有（糞）大腸菌群存在，再通過查MPN表就可得出相應（糞）大腸菌群的濃度值。

5,、試劑和材料

除非另有說明,，分析時均使用符合國家標準的分析純化學試劑。

5.1市售水質總大腸菌群,、糞大腸菌群測試片：10ml水樣量紙片按附錄A的方法進行質量鑒定,，達到要求后方可使用。

5.2無菌水

用新制備的去離子水或蒸餾水,，按無菌操作要求,，121℃高壓蒸汽滅菌20min，備用,。

5.3硫代硫酸鈉溶液：ρ(Na2S2O3)=0.10g/ml

稱取硫代硫酸鈉10g,，溶于適量蒸餾水（或去離子）中，稀釋至100ml,，現(xiàn)配,。

5.4乙二胺四乙酸二鈉（EDTA- Na2）溶液：ρ(C10H14N2O8Na2。 2H2O)=0.15g/ml

稱取EDTA-Na2 15g,溶于適量蒸餾水（或去離子水）中,，稀釋至100ml,，此溶液保質期為30d。

6,、儀器和設備

6.1 恒溫培養(yǎng)箱：37℃±1℃,。

6.2 恒溫培養(yǎng)箱：44℃±0.5℃。

6.3 高壓蒸汽滅菌器：121℃,、101.3kpa,。

6.4 冰箱：0-4℃

6.5 移液管：1±0.01ml、10±0.1ml,。

6.6 試管：φ15mm×150mm.

6.7 采樣瓶：500ml,。

注1：移液器、試管,、采樣瓶等玻璃器皿實驗前要按無菌操作要求包扎,，121℃高壓蒸汽滅菌20min，烘干,，備用,。

7、樣品

用滅菌器具,，按照HJ/T 91的規(guī)定及無菌操作的要求,，采集水樣400ml放入已滅菌的采樣瓶中。如果是經加氯處理的廢水,，需在采樣瓶滅菌前加入乙二胺四乙酸二鈉（EDTA- Na2）溶液（5.4）1.2ml,，以消除干擾,。酸性樣品，需調節(jié)胖胖的PH值至7.0-8.0,。

采樣后2h內檢測,，否則，需10℃以下冷藏并6h內送檢,，實驗室接樣后,，應將樣品放入0-4℃冰箱并2h內測定。

注2:10mg硫代硫酸鈉可保證去除水樣中1.5mg余氯,，硫代硫酸鈉用量克根據(jù)水樣實際余氯量調整,。

8、分析步驟

8.1接種量

每個樣品按三個不同的接種量接種,，每個接種量分別接種5張紙片,，共接種15張紙片。

根據(jù)水樣的污染程度確定接種量,，應盡可能使5個接種量大的紙片為陽性,、5個接種量小的紙片為陰性。

清潔水樣的參考接種量分別為10 ml,、1 ml,、0.1 ml，受污染水樣參考接種量根據(jù)污染程度可接種1 ml,、0.1ml,、0.01 ml或0.1 ml、0.01 ml,、0.001 ml等,。

接種量小于1ml時，水樣應制成稀釋樣品后使用,。接種量為0.1ml,、0.01 ml時，分別制成1:10稀釋樣品,、1:100稀釋樣品,。其它接種量的稀釋樣品依次類推。

1:10稀釋樣品的制作方法為：吸取1ml水樣,，注入盛有9 ml無菌水的試管中,，混勻，制成1:10稀釋樣品,。其它稀釋度的稀釋樣品同法制作,。

8.2接種、培養(yǎng)

水樣充分混勻,，按無菌操作制作稀釋水樣及接種水樣,。

清潔水樣，接種水樣總量為55.5ml,，10 ml水樣量紙片5張,，每張接種水樣10ml，1 ml水樣量紙片10張,，其中5張各接種水樣1ml,，另5張各接種1:10的稀釋水樣1ml。受污染水樣,，接種3個不同稀釋度的1ml稀釋水樣各5張,。

接種水樣應均勻涂布于紙片上，紙片充分侵潤,、吸收水樣,，用手輕輕壓平，做好標記,。

測總大腸菌群時,，在37±1℃的條件下培養(yǎng)18-24h后觀察結果；測糞大腸菌群時,，在44.5±0.5℃的條件下培養(yǎng)18-24h后觀察結果,。

注3：

1、檢測糞大腸菌群時,，紙片接種后應立即放置于44.5±0.5℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，在常溫下放置過久將影響檢測結果的準確性。

2,、紙片加入水樣后,，短時間內變黃或退色，表明水樣存在酸性物質活氧化劑干擾,，需按“7樣品”一節(jié)方法去除相應干擾,。

9、結果判定

（1）紙片上出現(xiàn)紅斑或紅暈且周圍變黃,，為陽性,。

（2）紙片全片變黃，無紅斑或紅暈,，為陽性,。

（3）紙片部分變黃，無紅斑或紅暈,，為陰性,。

（4）紙片的紫色背景上出現(xiàn)紅斑或紅暈，而周圍不變黃,，為陰性,。

（5）紙片無變化,，為陰性。