制備型液相色譜儀分離和純化優(yōu)化方法介紹
閱讀：2980 發(fā)布時(shí)間：2018-9-6
廣州艾欣科學(xué)儀器有限公司為您提供全面的制備型液相色譜儀分離/純化優(yōu)化方法，制備色譜柱的選擇方法等,。
一,、制備型液相色譜儀的選擇方法
1、分離模式的選擇（在樣品可能分離的條件下使用分析色譜柱進(jìn)行測(cè)試）
如果樣品有多種可分離的模式,，請(qǐng)?jiān)谶x擇上考慮以下幾點(diǎn)
1）分離的效率：分離能力,、樣品上樣量、制備時(shí)間,；
2）經(jīng)濟(jì)性：填料,、流動(dòng)相的成本、單位時(shí)間的處理量,；
3）其他：安全性,、目標(biāo)成分的變性、系統(tǒng)的簡(jiǎn)易性,。
2,、制備規(guī)模的選擇
根據(jù)樣品的處理量選擇制備柱的內(nèi)徑以及填料的粒徑。表1列舉了選擇制備柱內(nèi)徑和填料粒徑的基本標(biāo)準(zhǔn),。
選擇制備柱內(nèi)徑和填料粒徑的基本標(biāo)準(zhǔn)
1）制備柱內(nèi)徑
樣品的上樣量與制備柱的橫截面積是成正比的,，所以必須要選擇適合樣品上樣量的制備柱內(nèi)徑。
2）填料的粒徑
填料的粒徑越小制備柱的柱效越高,，同時(shí)填料的價(jià)格也越高,。另外由于柱壓也會(huì)變高，因此對(duì)所使用設(shè)備的耐壓性要求也會(huì)相應(yīng)的提高,。
在目標(biāo)成分與相近的峰分離不充分等情況下,，可選擇使用粒徑小的填料來(lái)提高分離效果。反之,，粒徑越大制備柱的柱效就越低,，當(dāng)然填料的價(jià)格也更便宜，柱壓也會(huì)隨之降低,。
3）制備柱的長(zhǎng)度
柱長(zhǎng)越長(zhǎng)分離能力就越高,，樣品的上樣量也會(huì)增加。但由于柱長(zhǎng)和柱壓成正比,，因此柱子越長(zhǎng)柱壓也就越高,。
二、制備條件的優(yōu)化
根據(jù)使用的粒徑確定制備條件
使用已確定粒徑大小的填料對(duì)樣品的分離進(jìn)行測(cè)試,。測(cè)試時(shí)使用分析色譜柱,，并對(duì)制備條件進(jìn)行優(yōu)化
為了能更有效地進(jìn)行制備條件的摸索,我們推薦使用YMC-Pack R&D系列色譜柱。
1、洗脫條件的優(yōu)化
制備不同于分析,首先要考慮的是更有效地得到更高純度的目標(biāo)成分和高收率,。進(jìn)行制備的關(guān)鍵點(diǎn)是在考慮必須分離的物質(zhì)和其余物質(zhì)的基礎(chǔ)上來(lái)設(shè)定洗脫條件,。
由于制備所用的填料粒徑比分析用的填料粒徑大,因此柱效會(huì)有所降低,，可能得不到一些必要的分離,。在這種情況下,通過(guò)調(diào)整洗脫條件及降低線流速可改善分離。
即使這樣分離仍然不充分的話,可嘗試改變柱長(zhǎng)和填料粒徑,。
2,、上樣量的摸索
分階段增加上樣量,從而求得能得到目標(biāo)純度的大上樣量。然后根據(jù)大上樣量來(lái)計(jì)算放大到制備色譜柱的上樣量,。
3,、制備型液相色譜儀的合理性確認(rèn)
實(shí)際進(jìn)行制備時(shí)首先需確認(rèn)流速和柱壓等是否適合設(shè)備的性能。如果要在制備柱上取得和分析測(cè)試時(shí)一樣的分離效果,線流速必須要與分析測(cè)試時(shí)柱的數(shù)值保持一致,，制備柱的流速可通過(guò)按測(cè)試用柱的流速的橫切面積的正比來(lái)設(shè)定，從而獲得相同的線流速,。
如果線流速是一致的,，那制備柱的壓力和測(cè)試用柱的壓力也是相同的。
如果柱壓超過(guò)設(shè)備的耐壓限度,必須改變流速,、柱長(zhǎng)等條件,。并且管線等也需要更改為適合流速的尺寸。
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