蛋白質(zhì)280nm/254nm雙波長測定：

蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸,。它們具有吸收紫外光的性質(zhì),，其吸收高峰在280nm波長處，且在此波長內(nèi)吸收峰的光密度值與其濃度成正比關(guān)系,，故可作為蛋白質(zhì)定性,、定量測定的依據(jù)，正因為如此,，280nm處的紫外吸收法通常被用于層析系統(tǒng)中蛋白質(zhì)濃度的連續(xù)監(jiān)控,。但由于各種蛋白質(zhì)的酪氨酸和色氨酸的含量不同，故要準確定量,，必需要有待測蛋白質(zhì)的純品作為標準來比較,，或且已經(jīng)知道其消光系數(shù)作為參考。另外,，不少非蛋白物質(zhì)在280nm波長下也有-定吸收能力,，可能發(fā)生干擾。其中尤以核酸（嘌呤和嘧啶堿）的影響更為嚴重,。在280nm處的吸收比蛋白質(zhì)強10倍（每克）,，但核酸在254nm處的吸收更強，其吸收高峰在254nm附近,。核酸254nm處的消光系數(shù)是280nm處的2倍,，

而蛋白質(zhì)則相反，280nm紫外吸收值大于254nm的吸收值,。

通常：

純蛋白質(zhì)的光吸收比值：A280/A254》1.8

純核酸的光吸收比值：A280/A254《0.5

因此蛋白質(zhì)溶液中同時存在核酸時（生物體系大多數(shù)如此）,，必須同時測定OD254nm，與OD280nm,。然后根據(jù)兩種波長的吸收度的比值,，通過經(jīng)驗公式校正,，以消除核酸的影響而推算出蛋白質(zhì)的真實含量。

蛋白質(zhì)濃度=1.45×A280－0.74×A254（mg/ml）

此經(jīng)驗公式是通過一系列已知不同濃度比例的蛋白質(zhì)（酵母烯醇化酶）和核酸（酵母核酸）的混合液所測定的數(shù)據(jù)來建立的,。