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三環(huán)抗抑郁劑固相萃取凈化方法
閱讀：3032 發(fā)布時間：2010-5-26
三環(huán)抗抑郁劑固相萃取凈化方法
1. 樣品制備
A. 血漿或血清
1mL的血漿或血清中加入4mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液（pH6.0），充分混合,，用1.0mol/L的KOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0±0.5；
B. 全血
1mL血液中加入2mL甲醇,，充分混合，離心去除蛋白沉淀,；
取上清液，加入10mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液（pH6.0）,，充分混合,，將用1.0mol/L的KOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0±0.5；
2. SPE凈化
a. 活化：用2mL甲醇,，2mL去離子水和1mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液（pH6.0）分別沖洗柱床,；
注意：要保證吸附劑不干燥；
b. 上樣：上樣流速控制在1~2mL/min,；
c. 淋洗：分別用3mL去離子水,，1mL1.0mol/L的醋酸和3mL的甲醇分別淋洗，zui后將SPE柱抽5min至干燥,；
d. 洗脫：用2mL二氯甲烷/異丙醇/氨水（78:20:2）以1~2mL/min的速度進行洗脫,。收集全部洗脫液；
注意：洗脫液必須為當天新制備的新鮮溶液,。
3. 蒸發(fā)干燥
將洗脫液在40℃以下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干 ,；
4. 檢測方法
GC-NPD 或者GC-MS分析
衍生化
用50μL乙酸乙酯溶解蒸發(fā)后的樣品 ，加入50μL五氟丙酰酸酐（PFPA）,，充氮氣并密封,，在70℃ 反應(yīng)20min,，冷卻至室溫，蒸發(fā)至干,； 100μL乙酸乙酯定容 ,。
非衍生化方法
沒有衍生化的樣品也可以直接進行分析，用100μL甲醇重新定容,；進1~ 3μL測定,；
LC檢測
將第3步中的樣品，用200μL乙腈/去離子水（25:75）定容,，用漩渦混合器混合30s,，進100μL測定。
5. 樣品成分
三環(huán)抗抑郁劑
1. 樣品制備
A. 血漿或血清
1mL的血漿或血清中加入4mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液（pH6.0），充分混合,，用1.0mol/L的KOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0±0.5；
B. 全血
1mL血液中加入2mL甲醇,，充分混合，離心去除蛋白沉淀,；
取上清液，加入10mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液（pH6.0）,，充分混合,，將用1.0mol/L的KOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0±0.5；
2. SPE凈化
a. 活化：用2mL甲醇,，2mL去離子水和1mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液（pH6.0）分別沖洗柱床,；
注意：要保證吸附劑不干燥；
b. 上樣：上樣流速控制在1~2mL/min,；
c. 淋洗：分別用3mL去離子水,，1mL1.0mol/L的醋酸和3mL的甲醇分別淋洗，zui后將SPE柱抽5min至干燥,；
d. 洗脫：用2mL二氯甲烷/異丙醇/氨水（78:20:2）以1~2mL/min的速度進行洗脫,。收集全部洗脫液；
注意：洗脫液必須為當天新制備的新鮮溶液,。
3. 蒸發(fā)干燥
將洗脫液在40℃以下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干 ,；
4. 檢測方法
GC-NPD 或者GC-MS分析
衍生化
用50μL乙酸乙酯溶解蒸發(fā)后的樣品 ，加入50μL五氟丙酰酸酐（PFPA）,，充氮氣并密封,，在70℃ 反應(yīng)20min,，冷卻至室溫，蒸發(fā)至干,； 100μL乙酸乙酯定容 ,。
非衍生化方法
沒有衍生化的樣品也可以直接進行分析，用100μL甲醇重新定容,；進1~ 3μL測定,；
LC檢測
將第3步中的樣品，用200μL乙腈/去離子水（25:75）定容,，用漩渦混合器混合30s,，進100μL測定。
5. 樣品成分
三環(huán)抗抑郁劑
本方法中使用的SPE柱
Bond Elut Certify（130mg,3mL, PN.12102051）,。
Bond Elut Certify（130mg,3mL, PN.12102051）,。