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水產(chǎn)品中孔雀石綠固相萃取凈化方法
閱讀：4301 發(fā)布時間：2010-5-21
水產(chǎn)品中孔雀石綠固相萃取凈化方法
1. 樣品前處理
稱取5.00g切碎的樣品,，依次加入1mL鹽酸羥胺（0.25g/mL）溶液,、2mL對-甲苯磺酸（1.0mol/L）溶液、2mL乙酸銨緩沖溶液（0.1mol/L）和40mL乙腈,，勻漿2min （10000r/min）,，離心3min（3000r/min），將上清液轉移到250mL分液漏斗中,，用20mL乙腈重復提取殘渣一次,，合并上清液。于分液漏斗中加入30mL二氯甲烷,、35mL水,，振搖2min，靜置分層,，收集下層有機層,，再用20mL二氯甲烷萃取一次，合并二氯甲烷萃取液,，45℃旋轉蒸發(fā)近干,。
2. SPE凈化
a. 活化：PRS柱，依次用3mL乙腈,、3mL甲酸溶液活化,；中性氧化鋁柱，用5mL乙腈活化；
b. 上樣：將中性氧化鋁柱AL-N串接在PRS柱上方,。用6mL乙腈分三次（每次2mL）用旋渦震蕩器渦旋溶解上述提取物,，并依次過柱，控制柱流速不超過0.6mL/min,；
c. 淋洗：再用2mL乙腈淋洗中性氧化鋁柱后,，棄去中性氧化鋁柱。依次用3mL 2%（v/v）甲酸溶液,、3mL乙腈淋洗PRS柱,，棄去流出液；
d. 洗脫：用4mL5%（v/v）乙酸銨甲醇溶液洗脫,，洗脫流速為1mL/min,，用10mL刻度試管收集洗脫液，用水定容至10.0mL,，樣液經(jīng)0.2μm濾膜過濾,，待測。
3. HPLC-MS/MS檢測
液相色譜-串聯(lián)質譜條件
a） 色譜柱：Pursuit C18柱,，50mm×2.1mm×3μm,；
b） 流動相：乙腈：5mmol/L乙酸銨（75:25, v/v）；
c） 流速：0.2mL/min,；
d） 柱溫：35℃,；
e） 進樣量：10μL；
f ） 離子源： ESI,，正離子,；
g） 掃描方式：多反應監(jiān)測MRM。
4. 樣品組分
孔雀石綠,、氘代孔雀石綠,、結晶紫、氘代隱色孔雀石綠,、隱色孔雀石綠和隱色結晶紫
稱取5.00g切碎的樣品,，依次加入1mL鹽酸羥胺（0.25g/mL）溶液,、2mL對-甲苯磺酸（1.0mol/L）溶液、2mL乙酸銨緩沖溶液（0.1mol/L）和40mL乙腈,，勻漿2min （10000r/min）,，離心3min（3000r/min），將上清液轉移到250mL分液漏斗中,，用20mL乙腈重復提取殘渣一次,，合并上清液。于分液漏斗中加入30mL二氯甲烷,、35mL水,，振搖2min，靜置分層,，收集下層有機層,，再用20mL二氯甲烷萃取一次，合并二氯甲烷萃取液,，45℃旋轉蒸發(fā)近干,。
2. SPE凈化
a. 活化：PRS柱，依次用3mL乙腈,、3mL甲酸溶液活化,；中性氧化鋁柱，用5mL乙腈活化；
b. 上樣：將中性氧化鋁柱AL-N串接在PRS柱上方,。用6mL乙腈分三次（每次2mL）用旋渦震蕩器渦旋溶解上述提取物,，并依次過柱，控制柱流速不超過0.6mL/min,；
c. 淋洗：再用2mL乙腈淋洗中性氧化鋁柱后,，棄去中性氧化鋁柱。依次用3mL 2%（v/v）甲酸溶液,、3mL乙腈淋洗PRS柱,，棄去流出液；
d. 洗脫：用4mL5%（v/v）乙酸銨甲醇溶液洗脫,，洗脫流速為1mL/min,，用10mL刻度試管收集洗脫液，用水定容至10.0mL,，樣液經(jīng)0.2μm濾膜過濾,，待測。
3. HPLC-MS/MS檢測
液相色譜-串聯(lián)質譜條件
a） 色譜柱：Pursuit C18柱,，50mm×2.1mm×3μm,；
b） 流動相：乙腈：5mmol/L乙酸銨（75:25, v/v）；
c） 流速：0.2mL/min,；
d） 柱溫：35℃,；
e） 進樣量：10μL；
f ） 離子源： ESI,，正離子,；
g） 掃描方式：多反應監(jiān)測MRM。
4. 樣品組分
孔雀石綠,、氘代孔雀石綠,、結晶紫、氘代隱色孔雀石綠,、隱色孔雀石綠和隱色結晶紫
本方法中使用的SPE柱：
Bond Elut PRS（500mg,3mL, PN.12102039）和Bond Elut AL-N（1g,6mL, PN. 12256086 ）,。
Bond Elut PRS（500mg,3mL, PN.12102039）和Bond Elut AL-N（1g,6mL, PN. 12256086 ）,。
Tips:
本方法滿足國家標準關于水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測的要求！
本方法滿足國家標準關于水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測的要求！
我公司可提供產(chǎn)品： Bond Elut PRS（500mg,3mL, PN.12102039）
Bond Elut AL-N（1g,6mL, PN. 12256086 ）
北京東方惠普科技有限公司
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：徐兢苑