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尿液中的濫用藥物殘留多次洗脫固相萃取凈化方法
閱讀：4772 發(fā)布時(shí)間：2010-5-21
尿液中的濫用藥物殘留多次洗脫固相萃取凈化方法
1. 樣品預(yù)處理
3mL尿液,，加入4.5mL,，0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液（pH6.0）,，調(diào)整pH值至6.3-6.3,，加入β-葡萄糖苷酸酶,，50℃水解2小時(shí),。
2. Bond Elut Certify SPE凈化
a. 活化：2mL甲醇,，2mL水和2mL 0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液（pH6.0）分別預(yù)淋洗SPE柱床；
b. 上樣：磷酸鉀緩沖液液面與吸附劑平面水平時(shí),，立即上樣,；
c. 淋洗：用2mL 1mol/L乙酸淋洗，隨后以200mL/sec的速度通空氣吹掃柱床3min,；
d. 洗脫：
● 酸性和中性藥物用2mL氯仿/丙酮（ 3:1,，v/v）洗脫，接收洗脫液1；
● 然后用2mL甲醇淋洗SPE柱,，并再一次通空氣干燥3min,；
● 堿性藥物用2mL含有2%的氨水的乙酸乙酯/二氯甲烷/ 2-丙醇（5:4:1,v/v）溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液2,；
e. 洗脫液1經(jīng)氮吹干燥,，殘留物中加入100μL甲醇重新溶解，然后用4.5mL0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液（pH6.0）稀釋,；
3. Bond Elut Certify II SPE 凈化
a. 活化：2mL甲醇,，2mL水和2mL 0.1mol/L磷酸鉀緩沖液（pH6.0）分別預(yù)淋洗SPE柱床；
b. 上樣：處理后的洗脫液1,，直接載入活化好的SPE柱,；
c. 淋洗：用2mL 0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液淋洗柱床；
d. 以200mL/sec的速度通空氣吹掃柱床3min,；
e. 洗脫,，中性物質(zhì)用2mL乙酸乙酯/丙酮（4 :1）或氯仿/丙酮（ 3:1）洗脫，酸性物質(zhì)用2 mL甲醇洗脫,，分別收集洗脫液3和4,；
4. 檢測(cè)
● 堿性藥物洗脫液 經(jīng)氮吹干燥后，用100μL甲醇和重氮甲烷的香精油溶液進(jìn)行衍生化處理,，放置10min后，氮吹干燥,，然后用100μl乙酸乙酯溶解,，進(jìn)行GC-MS EI分析。
● 中性藥物洗脫液2經(jīng)氮吹干燥,，用100μL甲醇/水（1:1,v:v）重新溶解,，進(jìn)行LC-MS/MS分析；
● 酸性藥物洗脫液3經(jīng)氮吹干燥,，用100μL的Methelute溶劑（苯基-3-甲基氫氧化銨）重新溶解,，進(jìn)行GC-MS PCI檢測(cè)；
5. 樣品成分
非類固醇消炎止痛藥
卡布洛芬,，clanobutin,，扶他林，二氟尼酸,，依爾替酸,，依他尼酸，非諾洛芬,，氟芬那酸,，氟比洛芬，氟尼辛葡甲胺,，呋塞米,，吲哚美辛,，吲哚洛芬，苯酮苯丙酸,，痛立克,，甲氯滅酸，甲滅酸,，萘普生,，舒林酸苯噻丙酸，托芬那辛,，托麥汀,，維達(dá)洛芬，佐美酸
皮質(zhì)類固醇類藥物
強(qiáng)的松,，氫化可的松,，氟米松，氟美松,，加強(qiáng)龍,，醋酸曲安奈德，脫氧皮質(zhì)酮
1. 樣品預(yù)處理
3mL尿液,，加入4.5mL,，0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液（pH6.0）,，調(diào)整pH值至6.3-6.3,，加入β-葡萄糖苷酸酶,，50℃水解2小時(shí),。
2. Bond Elut Certify SPE凈化
a. 活化：2mL甲醇,，2mL水和2mL 0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液（pH6.0）分別預(yù)淋洗SPE柱床；
b. 上樣：磷酸鉀緩沖液液面與吸附劑平面水平時(shí),，立即上樣,；
c. 淋洗：用2mL 1mol/L乙酸淋洗，隨后以200mL/sec的速度通空氣吹掃柱床3min,；
d. 洗脫：
● 酸性和中性藥物用2mL氯仿/丙酮（ 3:1,，v/v）洗脫，接收洗脫液1；
● 然后用2mL甲醇淋洗SPE柱,，并再一次通空氣干燥3min,；
● 堿性藥物用2mL含有2%的氨水的乙酸乙酯/二氯甲烷/ 2-丙醇（5:4:1,v/v）溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液2,；
e. 洗脫液1經(jīng)氮吹干燥,，殘留物中加入100μL甲醇重新溶解，然后用4.5mL0.1mol/L的磷酸鉀緩沖液（pH6.0）稀釋,；
3. Bond Elut Certify II SPE 凈化
a. 活化：2mL甲醇,，2mL水和2mL 0.1mol/L磷酸鉀緩沖液（pH6.0）分別預(yù)淋洗SPE柱床；
b. 上樣：處理后的洗脫液1,，直接載入活化好的SPE柱,；
c. 淋洗：用2mL 0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液淋洗柱床；
d. 以200mL/sec的速度通空氣吹掃柱床3min,；
e. 洗脫,，中性物質(zhì)用2mL乙酸乙酯/丙酮（4 :1）或氯仿/丙酮（ 3:1）洗脫，酸性物質(zhì)用2 mL甲醇洗脫,，分別收集洗脫液3和4,；
4. 檢測(cè)
● 堿性藥物洗脫液 經(jīng)氮吹干燥后，用100μL甲醇和重氮甲烷的香精油溶液進(jìn)行衍生化處理,，放置10min后，氮吹干燥,，然后用100μl乙酸乙酯溶解,，進(jìn)行GC-MS EI分析。
● 中性藥物洗脫液2經(jīng)氮吹干燥,，用100μL甲醇/水（1:1,v:v）重新溶解,，進(jìn)行LC-MS/MS分析；
● 酸性藥物洗脫液3經(jīng)氮吹干燥,，用100μL的Methelute溶劑（苯基-3-甲基氫氧化銨）重新溶解,，進(jìn)行GC-MS PCI檢測(cè)；
5. 樣品成分
非類固醇消炎止痛藥
卡布洛芬,，clanobutin,，扶他林，二氟尼酸,，依爾替酸,，依他尼酸，非諾洛芬,，氟芬那酸,，氟比洛芬，氟尼辛葡甲胺,，呋塞米,，吲哚美辛,，吲哚洛芬，苯酮苯丙酸,，痛立克,，甲氯滅酸，甲滅酸,，萘普生,，舒林酸苯噻丙酸，托芬那辛,，托麥汀,，維達(dá)洛芬，佐美酸
皮質(zhì)類固醇類藥物
強(qiáng)的松,，氫化可的松,，氟米松，氟美松,，加強(qiáng)龍,，醋酸曲安奈德，脫氧皮質(zhì)酮
甲酯化或者重氮甲烷衍生化后通過(guò)GC-MS/MS檢測(cè)的中性和酸性藥物
乙醇和乙二醇類
麥酚生 ,，美索巴莫,，愈創(chuàng)藍(lán)油烴，心得安乙二醇代謝物
苯二氮平類
安定,，去甲羥基安定,，硝基安定，羥基安定
巴比妥類
戊巴比妥,，戊巴比妥代謝物,，苯巴比通 ，異戊巴比妥
其它藥物
苯坐卡因,，普羅林坦內(nèi)酰胺代謝物 ,，*，安體舒通
利尿劑
雙氯非那胺,，bendroflumethazide ,，環(huán)戊氯噻嗪，喹乙唑酮,，氯噻酮,，氯噻，甲氯噻嗪,，美托拉腙
Pyrazolidindiones
苯基丁氮酮,，ketasone ，羥基保泰松，γ-羥基苯基丁氮酮
黃嘌呤類
咖啡因,，茶堿 ,，可可堿 ，1,，7-二甲基黃嘌呤,，羥乙基茶堿，己酮可可堿
其它雜環(huán)類藥物
丙基安替比林,，美芬妥英,，苯妥英，甲乙哌酮
乙醇和乙二醇類
麥酚生 ,，美索巴莫,，愈創(chuàng)藍(lán)油烴，心得安乙二醇代謝物
苯二氮平類
安定,，去甲羥基安定,，硝基安定，羥基安定
巴比妥類
戊巴比妥,，戊巴比妥代謝物,，苯巴比通 ，異戊巴比妥
其它藥物
苯坐卡因,，普羅林坦內(nèi)酰胺代謝物 ,，*，安體舒通
利尿劑
雙氯非那胺,，bendroflumethazide ,，環(huán)戊氯噻嗪，喹乙唑酮,，氯噻酮,，氯噻，甲氯噻嗪,，美托拉腙
Pyrazolidindiones
苯基丁氮酮,，ketasone ，羥基保泰松，γ-羥基苯基丁氮酮
黃嘌呤類
咖啡因,，茶堿 ,，可可堿 ，1,，7-二甲基黃嘌呤,，羥乙基茶堿，己酮可可堿
其它雜環(huán)類藥物
丙基安替比林,，美芬妥英,，苯妥英，甲乙哌酮
本方法中使用的SPE柱：
Bond Elut Certify（130mg, 3mL,PN.12102051）和Bond Elut Certify II（200mg, 3mL, PN.12102080）,。
Bond Elut Certify（130mg, 3mL,PN.12102051）和Bond Elut Certify II（200mg, 3mL, PN.12102080）,。
我公司可提供產(chǎn)品：β-葡萄糖苷酸酶（德國(guó)默克公司,，貨號(hào)1.04114.0002）
北京東方惠普科技有限公司
詳情可致電：010-820178366/68
：徐兢苑