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產(chǎn)品簡介：

堿性條件下,，蛋白將Cu²⁺還原為Cu⁺， Cu⁺與BCA試劑形成紫藍色的絡合物,，測定其在562nm處的吸收值,，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度,。常用濃度的去垢劑SDS,，Triton X-100，Tween不影響檢測結果,，但受螯合劑(EDTA, EGTA),、還原劑（DTT,，巰基乙醇）和脂類的影響,。實驗中，若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,，可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒,。

操作說明：

一. 微孔酶標儀法

1. 配制工作液：根據(jù)標準品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液,，充分混勻(混合時可能會有渾濁,，但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定,。

2. 稀釋標準品：取10μL BSA標準品用PBS稀釋至100μL（樣品一般可用PBS稀釋）,，使終濃度為0.5mg/mL。將標準品按0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μL加到96孔板的蛋白標準品孔中,，加PBS補足至20μL,。

3. 將樣品作適當稀釋（最好多做幾個梯度,，如作2倍、4倍,、8倍稀釋）,，加20μL到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量樣品時誤差偏大,，標準線前面的點可能不很準確,，所以盡可能的讓樣品點落在標準線1/2后。

4. 各孔加入200μL BCA工作液,，37℃放置15-30分鐘,。用酶標儀測定A562nm，根據(jù)標準曲線計算出蛋白濃度,。使用溫箱孵育時,，應注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測結果。

二. 分光光度計法 如沒有酶標儀,，可用分光光度計在離心管中混勻后加入比色皿中比色,。 步驟如下：

1. 配制工作液: 根據(jù)標準品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液,，充分混勻(混合時可能會有渾濁,，但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定,。

2. 稀釋標準品：取100μL BSA標準品用PBS稀釋至1mL（樣品一般可用PBS稀釋）,，使終濃度為0.5mg/mL。

3. 取八支（或者更多）5mL離心管,，標上號,，按下表加入試劑。

4.37℃放置15-30分鐘,。用分光光度計測562nm處吸光值,，根據(jù)標準曲線計算出蛋白濃度。

注意事項：

1. 長期不用時,，Cu試劑與PBS稀釋液可置于2-8℃保存,，如發(fā)現(xiàn)細菌污染則應丟棄。BCA試劑在低溫條件下出現(xiàn)結晶沉淀時,，可37℃溫育使其全部溶解, 不影響使用,。

2. 樣品中若含有較多干擾物質(zhì)時，請采用Bradford蛋白濃度測定試劑盒,。

3. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。