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產(chǎn)品簡介：

堿性條件下,，蛋白將Cu²⁺還原為Cu⁺,， Cu⁺與BCA試劑形成紫藍(lán)色的絡(luò)合物,，測定其在562nm處的吸收值,，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比,，即可計(jì)算待測蛋白的濃度,。常用濃度的去垢劑SDS,，Triton X-100，Tween不影響檢測結(jié)果,，但受螯合劑(EDTA, EGTA),、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響,。實(shí)驗(yàn)中,，若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒,。

操作說明：

一. 微孔酶標(biāo)儀法

1. 配制工作液：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量,，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻(混合時(shí)可能會有渾濁,，但混勻后就會消失),。BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取10μL BSA標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至100μL（樣品一般可用PBS稀釋）,，使終濃度為0.5mg/mL,。將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μL加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加PBS補(bǔ)足至20μL。

3. 將樣品作適當(dāng)稀釋（最好多做幾個(gè)梯度,，如作2倍,、4倍、8倍稀釋）,，加20μL到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量樣品時(shí)誤差偏大,，標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確,，所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后。

4. 各孔加入200μL BCA工作液,，37℃放置15-30分鐘,。用酶標(biāo)儀測定A562nm，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度,。使用溫箱孵育時(shí),，應(yīng)注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測結(jié)果。

二. 分光光度計(jì)法 如沒有酶標(biāo)儀,，可用分光光度計(jì)在離心管中混勻后加入比色皿中比色,。 步驟如下：

1. 配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液,，充分混勻(混合時(shí)可能會有渾濁,，但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定,。

2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取100μL BSA標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至1mL（樣品一般可用PBS稀釋）,，使終濃度為0.5mg/mL。

3. 取八支（或者更多）5mL離心管,，標(biāo)上號,，按下表加入試劑。

4.37℃放置15-30分鐘,。用分光光度計(jì)測562nm處吸光值,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。

注意事項(xiàng)：

1. 長期不用時(shí),，Cu試劑與PBS稀釋液可置于2-8℃保存,，如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染則應(yīng)丟棄。BCA試劑在低溫條件下出現(xiàn)結(jié)晶沉淀時(shí),，可37℃溫育使其全部溶解, 不影響使用,。

2. 樣品中若含有較多干擾物質(zhì)時(shí)，請采用Bradford蛋白濃度測定試劑盒,。

3. 為了您的安全和健康,，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。