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柱式法提取細(xì)胞 RNA 試劑盒

貨號(hào)：R1250 

規(guī)格：50T/100T 

保存：室溫（15℃-25℃）干燥保存，有效期 1 年,。2℃-8℃保存時(shí)間更長(zhǎng),。

注意：使用前請(qǐng)先在結(jié)合液中加入異丙醇，漂洗液中加入無水乙醇,，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽,。 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 

該試劑盒對(duì)經(jīng)典的異硫氰酸胍抽提 RNA 的方法進(jìn)行了改良。改良后的裂解液能迅速裂解細(xì)胞,，釋放出 RNA 的同時(shí)滅活 RNase,。RNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜上，再通過一系列漂洗和離心等步驟進(jìn)一步將蛋白等雜質(zhì)去除,，最后用 RNase-Free ddH2O 將 RNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫,。本試劑盒操作快速便捷，安全無需使用酚,、氯仿等有毒試劑,，操作安全。 

操作步驟： 

1,、細(xì)胞裂解取 1*106~7 個(gè)細(xì)胞,，每管加入 500ul 裂解液 A，加入 50ul 溶液 B 用移液槍吹打混勻,，RT 放置 5min,。 

2、向離心管中加入 700μl 結(jié)合液 C(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入異丙醇),，上下顛倒充分混勻,。 

3、向吸附柱中加入 600ul 混合液,，靜置 1min,。4℃ 12000rpm 離心 1min，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管（收集管留下,，用于步驟 5 使用）中。 

備注：由于體積過大，需二次上柱,，再將剩余混合液重復(fù)步驟 3 

4,、將吸附柱放到新的干凈的 2ml 收集管上，在吸附柱中加入 500μL RNA 洗脫液,，4℃,，12000rpm 離心 2min，收集濾液,，扔掉吸附柱,。

5、在濾液中加入 700μl 結(jié)合液,，用移液槍吹打混勻后加入到新的吸附柱中,，（使用步驟 3 的收集管），4℃,，12000rpm 離心 2min,，棄濾液。 

備注：由于體積過大,，需二次上柱,，再將剩余混合液重復(fù)步驟 5 

6、向離心管中加入 600μL 漂洗液 1（使用前請(qǐng)確認(rèn)是否已加入無水乙醇）,，靜置1min,，4℃，12000rpm 離心 1min,，棄濾液,。 

7、向離心管中加入 600μL 漂洗液 2（使用前請(qǐng)確認(rèn)是否已加入無水乙醇）,，4℃,，12000rpm 離心 1min，棄濾液,。 

8,、4℃，12000rpm 離心 2min,，將吸附柱敞口室溫放置 3min,，以除去多余的乙醇。 

9,、將吸附柱放到一個(gè)干凈的離心管上,，向吸附柱中加入 30-100μL 洗脫液，室溫放置 2min,，4℃,，12000rpm 離心 2min,，得到 RNA 溶液，RNA 保存于-80℃,。 

注意事項(xiàng)： 

1,、所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為 RNase-free 產(chǎn)品，操作過程要小心,，帶口罩,、手套避免環(huán)境中 RNA 酶污染樣品。 

2,、洗脫液的體積不應(yīng)少于 30μL，體積過少會(huì)影響提取效率,，RNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-80℃,，以防 RNA 降解。 

3,、RNA 濃度及純度檢測(cè)：提取的 RNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度,。OD260/OD280 比值應(yīng)為 2.0-2.2。

備注：106 細(xì)胞樣品,，用 50μL RNase-free ddH2O 洗脫,。