IgM捕捉ELISA法（MacELISA）檢測出血熱IgM抗體
本試劑盒系采用抗人μ鏈捕獲人血清IgM抗體,，加辣根過氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物,，用以檢測出血熱特異性IgM抗體,。具有較高的敏感性,、特異性和重復(fù)性,。特別適用于出血熱的早期特異性診斷及其它實(shí)驗(yàn)性研究,。本試劑盒為96人份/包裝,。
試驗(yàn)材料：
（1）抗人IgM抗體（μ鏈）：用pH9.5的包被液包被酶標(biāo)板
（2）凍干陽性血清/凍干陰性血清1支,， 0.2ml/支，工作濃度為1：10,；
（3）凍干辣根過氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物1支,， 0.5ml/支，工作濃度為1：20,；
（4）凍干小牛血清1支,，1ml/支；
（5）濃縮洗液（10倍濃縮）1瓶,，50ml,；（標(biāo)本稀釋液為含5%小牛血清原倍洗液）；
（6）A/B顯色液和終止液各1瓶,。
（凍干試劑先用相應(yīng)量的去離子水溶解,，然后臨用前根據(jù)所需按工作濃度稀釋使用，余下的放-20℃保存）
（7）終止液：4N H2SO4
（8）酶標(biāo)儀,。
檢測步驟：
（1）將待檢血清用稀釋液100倍稀釋,，加入已包被抗人μ鏈抗體的酶標(biāo)板一孔中,，100μl/孔，同時(shí)加入已1：10稀釋的陽性血清/陰性血清對(duì)照各一孔,，100μl/孔,，置37℃水浴孵育1小時(shí)。
（2）棄去血清,，用PBS－T漂洗5遍,，甩干。
（3）將凍干辣根過氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物1：10稀釋后,，加入反應(yīng)板相應(yīng)孔內(nèi),，100μl/孔，37℃水浴孵育1小時(shí),。
（4）棄去酶標(biāo)抗體,，用洗滌液洗滌6次，甩干,。
（5）加顯色液:于各反應(yīng)孔內(nèi)加A/B液各一滴,，37℃，避光3～5分鐘,。
（6）加終止液（4NH2SO4）于每反應(yīng)孔,，一滴/孔。
結(jié)果判斷：
（1）目測方法：
陽性對(duì)照孔呈明顯藍(lán)色,，陰性對(duì)照孔呈無色,，對(duì)照成立；若待檢血清孔呈明顯淡藍(lán)色或深藍(lán)色（TMB）,，則標(biāo)本為出血熱IgM抗體陽性,，反之陰性。
（2）酶聯(lián)免疫檢測儀檢測：
于450nm（TMB）陽性對(duì)照孔OD值/陰性對(duì)照孔OD值,即P/N≥2.1,，對(duì)照成立,；若待檢血清孔OD值與陰性對(duì)照孔OD比值≥2.1，則標(biāo)本為流行性出血熱IgM抗體陽性,，反之陰性,。
（陰性對(duì)照孔OD值小于0.05按0.05記，若大于0.05按實(shí)際數(shù)值計(jì)算）
意義：
陽性結(jié)果,，表明患者新近漢坦病毒感染,，用于出血熱早期診斷。
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