用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被：用0.05M pH9.5碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含
量為1～10μg／ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，
4℃過夜,。次日，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分
鐘。（簡稱洗滌,，下同）,。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，
置37℃孵育1小時(shí),。然后洗滌,。（同時(shí)做空白孔，陰性對照孔及陽
性對照孔）,。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的
稀釋度）0.1ml,，37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌,。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液
0.1ml,，37℃孵育10～30分鐘。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏
色越深，陽性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色
的深淺，以“+”,、“-”號(hào)表示,。也可測OD值：在ELISA檢測
儀上，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處,，以空白對照孔調(diào)
零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為
陽性,。
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