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植物 Β-淀粉酶（Β-Amylase,，Β-AL）試劑盒

商品貨號(hào)：QS3402
英文名稱：β-amylase Assay Kit
別名：植物β-淀粉酶（β-AL）活性檢測(cè)試劑盒
檢測(cè)方法：常量法

產(chǎn)品詳細(xì)介紹

測(cè)定意義：

淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉，主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶,。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,，生成葡萄糖、麥芽糖,、麥芽三糖,、糊精等還原糖。

測(cè)定原理：

還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì),。α-淀粉酶不耐酸,，β-淀粉酶不耐熱。根據(jù)上述特性,，鈍化其中之一,，就可測(cè)出另一種淀粉酶的活力。

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

貨號(hào)：QS3402                規(guī)格：50 管/24 樣

  植物 β -淀粉酶（β -amylase,，β -AL）試劑盒說(shuō)明書(shū)

        可見(jiàn)分光光度法

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉,，主要包括 α -淀粉酶和 β -淀粉酶。β -淀粉酶(EC 3.2.1.2)可隨機(jī) 地作用于淀粉中的 α -1,4-糖苷鍵,，生成葡萄糖,、麥芽糖、麥芽三糖,、糊精等還原糖,。

測(cè)定原理：

還原糖還原 3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。α -淀粉酶不耐酸,，β -淀粉酶不耐熱。 根據(jù)上述特性,，鈍化其中之一,，就可測(cè)出另一種淀粉酶的活力。

自備實(shí)驗(yàn)用品和儀器：

可見(jiàn)分光光度計(jì),、恒溫水浴鍋,、離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、玻璃比色皿,、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：50mL×1 瓶，常溫保存,，若有黃色晶體析出,，需 90℃加熱溶解后再用；

試劑二：40mL×1 瓶,，4℃保存,，若有沉淀析出，需 70℃加熱后再用,。

粗酶液提?。?/strong>

組織：稱取 0.1~0.2g 樣本（建議稱取約 0.1g 樣本），加入 1mL 蒸餾水,，研磨勻漿,；將勻 漿倒入離心管中，提取液在室溫下放置提取 15min,，每 5min 振蕩 1 次,，使其充分提取,；3000g,， 25℃離心 10min，取上清液加蒸餾水定容至 10 mL,，搖勻,，即淀粉酶原液。

吸取上述淀粉酶原液 1mL,，加入 4mL 蒸餾水,，搖勻，即為淀粉酶稀釋液,，用于（α ＋β ） 淀粉酶總活力的測(cè)定,。

血清（漿）等液體樣本：（1）直接檢測(cè) α -淀粉酶。（2）吸取淀粉酶原液 1mL,，加入 4mL 蒸餾水,，搖勻，即為淀粉酶稀釋液,，用于（α ＋β ）淀粉酶總活力的測(cè)定,。

測(cè)定步驟：

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 540 nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、 試劑一和試劑二 40℃預(yù)熱 10min,。

3,、測(cè)定操作表：

混勻,，95℃水浴 5min,，冷卻，在 540nm 下測(cè)定吸光度,，從左到右分別記為 A1,、A2、A3 和 A4,。

酶活性計(jì)算：

1,、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸曲線為 y=3.7215x -0.1778； x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL）,，y 為吸光值,。

2、α -淀粉酶活性

（1）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活力單位,。

α -淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T =1.075×(A2-A1＋0.1778)÷W

（2）按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活性單位,。

α -淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷（V 樣×Cpr）÷T =0.1075×(A2-A1＋0.1778) ÷Cpr

（3）血清（漿）等液體樣本中 α -淀粉酶活性計(jì)算

單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活性單位。

α -淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷V 樣÷T=0.1075×(A2-A1 ＋0.1778)

3,、總淀粉酶活性計(jì)算

（1）按照樣品質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活力單位,。

總淀粉酶活性(mg/min//g 鮮重)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣 總)÷T=5.375×(A4-A3＋0.1778)÷W

（2）按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活力單位。

總淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷（V 樣×Cpr）÷T =0.5375×(A4-A3＋0.1778) ÷Cpr

（3）血清（漿）等液體樣本中總淀粉酶活性計(jì)算

單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活性單位,。

總淀粉酶活性(mg/min/mL) =5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷V 樣÷T =0.5375×(A4-A3＋0.1778)

4,、β -淀粉酶活性計(jì)算

（1）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活力單位。

β - 淀粉酶活性 (mg/min/g 鮮 重 )= 淀 粉 酶 總 活 性 -α - 淀粉酶活性 =[5.375×(A4-A3 ＋ 0.1778)-1.075×(A2-A1＋0.1778)]÷W

（2）按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活力單位,。

β -淀粉酶活性（mg/min/mg prot）=淀粉酶總活性-α -淀粉酶活性=[0.5375×(A4-A3＋ 0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778)]÷Cpr

（3）血清（漿）等液體樣本中 β -淀粉酶活性計(jì)算

單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活性單位,。

β - 淀 粉 酶 活 性 （ mg/min/mL ） = 淀 粉 酶 總 活 性 -α - 淀 粉 酶 活 性 =0.5375×(A4-A3 ＋ 0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778)

5：總淀粉酶稀釋倍數(shù)；V 反總：反應(yīng)體系總體積,，0.5mL,；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25 mL,；V 樣總：提取液總體積,，10 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,； T：反應(yīng)時(shí)間，5min,。