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HPLC中離子排斥色譜柱死體積該如何計(jì)算?
各位小伙伴都聽說過死體積吧,。死體積越大,，導(dǎo)致樣品擴(kuò)散的空間很大,，色譜峰會更容易展寬,，峰形變差,。那么死體積該如何定義呢，死體積大小如何計(jì)算,，這里小編就給各位小伙伴做個介紹,。
死體積的定義：
死體積狹義上指的是Hamilton 離子排斥色譜柱中未被固定相占據(jù)的空隙體積，即色譜柱內(nèi)流動相的體積,。廣義上的死體積是指進(jìn)樣位置(進(jìn)樣口)到檢測位置(檢測器流通池)這一段的體積(PS:除去色譜柱中填料體積),，一旦色譜柱連接，這段體積(圖示橙色管路)是不變的(死的),。
HPLC中離子排斥色譜柱死體積該如何計(jì)算?
死體積(dead volume,V0)——由進(jìn)樣器進(jìn)樣口到檢測器流動池未被固定相所占據(jù)的空間,。它包括4部分：進(jìn)樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙(被流動相占據(jù),，Vm),、柱出口管路體積、檢測器流動池體積,。其中只有Vm參與色譜平衡過程,，其它3部分只起峰擴(kuò)展作用。為防止峰擴(kuò)展,，這3部分體積應(yīng)盡量減小,。
死時間(dead time,t0)——不保留組分的保留時間。即流動相(溶劑)通過色譜柱的時間,。
測量系統(tǒng)死體積通常需要通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測量,，常用方法是通過進(jìn)一針和色譜柱固定相沒有任何作用的特殊溶液(方法中會有規(guī)定，例如：尿嘧啶,，少量NaNO3或甲醇溶于流動相得到的溶液,，也有直接用*色譜純甲醇進(jìn)樣的情形)時,，就會得到一個色譜峰，由此峰可以測得死時間(t0),，這就是t0的實(shí)測結(jié)果,。
然后通過計(jì)算得到系統(tǒng)死體積：
死體積(V0) = 死時間t0×流動相的流速F。
減小死體積的注意事項(xiàng)：
在我們使用或維護(hù)的過程中,，如果涉及管路等配件的更換,，應(yīng)該選擇與原規(guī)格一致的配件，以確保死體積與原來一致,，避免死體積的增加而帶來峰形的展寬,。
接裝色譜柱時，需確保管線接頭匹配完好(特別注意peek管接頭的使用,，以及管線與色譜柱的連接處)避免形成接頭空腔.