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Silica硅膠色譜柱使用方法
Silica硅膠色譜柱使用方法
1.稱量,。200-300目硅膠，稱30-70倍于上樣量,；如果極難分,，也可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右,，所以要稱40g硅膠,，用燒杯量100ml也可以。
2.攪成勻漿,。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌,。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系,，就用石油醚拌。
3.裝柱,。將柱底用棉花塞緊,，不*海沙，加入約1/3體積石油醚,，裝上蓄液球,，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內(nèi),。隨著沉降,，會有一些硅膠沾在蓄液球內(nèi)，用石油醚將其沖入柱中,。
4.壓實,。沉降完成后，加入更多的石油醚,，用雙聯(lián)球或氣泵加壓,，直至流速恒定。柱床約被壓縮至9/10體積,。無論走常壓柱或加壓柱,，都應(yīng)進行這一步，可使分離度提高很多,，且可以避免過柱時由于柱床萎縮產(chǎn)生開裂,。
5.上樣。干法濕法都可以,。海沙是沒必要的,。上樣后，加入一些洗脫劑,，再將一團脫脂棉塞至接近硅膠表面,。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞硅膠表面,。
6.過柱和收集,。柱層析實際上是在擴散和分離之間的權(quán)衡。太低的洗脫強度并不好,，推薦用梯度洗脫,。收集的例子：10mg上樣量，1g硅膠H,，0.5ml收一餾分,；1-2g上樣量，50g硅膠（200-300目），20-50ml收一餾分,。
7.檢測,。要更多地使用噴顯劑，如果僅用紫外燈,，會損失較多產(chǎn)品,，紫外的靈敏度一般比噴顯劑低1-2個數(shù)量級。
8.送譜,。收集的產(chǎn)品旋干,，在送譜前通常需要重結(jié)晶。如果樣品太少或為液體,，可過一小凝膠柱,，作為送譜前的后純化手段?？沙渥V1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰,。