酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）實驗方法

時間：2022/4/21閱讀：1052

ELISA試劑盒的關(guān)鍵是要具備高質(zhì)量純化或重組的抗原，對生產(chǎn)廠家的抗原要求很高。由于純化的或重組的抗原越來越多，以及商品化的高質(zhì)量的ELISA試劑盒的面市，它應(yīng)用于臨床免疫實驗室的自身抗體的檢測已日漸增多,，該法檢測自身抗體快速、敏感及特異性高,。

一,、免疫熒光法----自身抗體診斷的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)（IFA）

免疫熒光測定法可分為直接和間接兩類，在自身抗體檢測中,，以間接免疫熒光法尤為常用,。由于自身抗原的位置決定了其相應(yīng)的抗體的典型熒光模式，該法能通過顯微鏡觀測精確地判斷組織或細(xì)胞內(nèi)熒光的分布,。

將已稀釋血清與實驗基質(zhì)進(jìn)行溫育,，令特異性抗體與實驗基質(zhì)中相應(yīng)抗原結(jié)合，然后再與熒光標(biāo)記的第二抗體溫育,，最后在熒光顯微鏡下觀察相應(yīng)部位的特異性熒光模式,。

此方法敏感、重復(fù)性好,。但需要一臺質(zhì)量較好的熒光顯微鏡,，且對操作人員要較高，操作復(fù)雜耗時長,，繁瑣,。

二、免疫印跡法（Immunoblotassay）（westerblot）

此法是將聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白及多肽與免疫反應(yīng)的高特異性相結(jié)合的一項技術(shù),。蛋白質(zhì)在電泳中依分子量大小分離,，然后將分離好的蛋白轉(zhuǎn)印到硝酸纖維薄膜上，用酶標(biāo)記的抗體或蛋白A進(jìn)行染色,。該法簡單,、快速,。是目前美國,、中國等國際上眾多國家衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的最終確認(rèn)方法,。但其制備方法繁瑣、成本相對較高,。