1  儀器和試藥

　　液相色譜；TCQ-250超聲波清洗儀（北京醫(yī)療設(shè)備二廠）,；電子天平AEG-220紫外分光光度儀UV-265甲醇為優(yōu)級(jí)純,；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純,；苦參堿對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供（批號(hào)：110805-200306）,。
　　2  方法與結(jié)果

　　2．1  色譜條件

　　Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）,；流動(dòng)相乙腈-甲醇-磷酸鹽溶液（25∶10∶65）,；檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm；流速1 ml/min,；柱溫25 ℃,。

　　2．2  供試品溶液的制備

　　取本品50 ml，搖勻,，精密量取5 ml,，加濃氨試液調(diào)pH＝10后，用氯仿（30,、30,、30、20,、20 ml）提取5次,，合并提取液，揮干氯仿,，加甲醇適量溶解殘?jiān)?，濾過(guò)，濾渣,、容器用甲醇洗滌3次,，每次5 ml，合并洗液與濾液,，定量轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶中,，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò),，取續(xù)濾液,，即得。

　　2．3  對(duì)照品溶液的制備

　　取經(jīng)P2O5減壓干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品適量,，精密稱定,，加流動(dòng)相制成每毫升約含0.530 mg的對(duì)照品溶液。

　　2．4  陰性對(duì)照品溶液的制備

　　取缺苦參總生物堿的樣品適量,，依供試品溶液的制備法,，制備陰性對(duì)照品溶液,。

　　2．5  系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

　　分別取對(duì)照品溶液,、陰性對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μl注入液相色譜儀,，記錄色譜圖,。結(jié)果表明供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,，有相同保留時(shí)間的色譜峰,，陰性對(duì)照無(wú)干擾。理論塔板數(shù)為8 128,。

　　2．6  線性關(guān)系考察

　　精密稱取苦參堿對(duì)照品適量,，依對(duì)照品溶液制備法制備濃度0.106、0.318,、0.530,、0.742、0.954 g/L的溶液,，分別精密吸取上述溶液5 μl,，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo),，對(duì)照品質(zhì)量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，得回歸方程為：Y=38788X－53（r=0.999 8），表明苦參堿在0.53~4.77 μg呈線性關(guān)系,。

　　2．7  精密度試驗(yàn)

　　精密吸取上述苦參堿對(duì)照品溶液,，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定苦參堿峰面積,，RSD為1.58%,，表明精密度良好。

　　2．8  穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　精密量取本品適量,，依供試品溶液制備法制備供試品溶液,，再精密吸取供試品溶液10 μl，依上述色譜條件在0、2,、4,、6、8 h分別進(jìn)行測(cè)定,，記錄峰面積,，RSD為1.49%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定,。

　　2．9  重復(fù)性試驗(yàn)

　　分別精密量取同一樣品5份,，依供試品溶液制備法制備5份供試品溶液，精密吸取供試品溶液各10 μl,，依上述色譜條件測(cè)定,，RSD為0.95%，表明該方法的重復(fù)性良好,。

　　2．10  加樣回收率試驗(yàn)

　　精密量取0.5 ml已知含量（35.767 g/L）的婦得康洗劑5份,，分別添加苦參堿對(duì)照品適量，按上述供試品溶液制備法制備加樣回收供試品溶液,，并進(jìn)行測(cè)定,，計(jì)算回收率，見表1,。結(jié)果苦參堿的平均回收率為98.6%,，RSD為1.17%。

　　2．11  樣品測(cè)定

　　精密量取樣品適量,，依供試品溶液制備法制備供試品溶液,，分別精密吸取對(duì)照品溶液5 μl與供試品溶液10 μl注入液相色譜儀，依上述色譜條件測(cè)定,，記錄苦參堿峰面積,，重復(fù)測(cè)定2次，取平均值,。結(jié)果見表2,。表1  苦參堿的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果2  10批樣品中苦參堿的含量

　　3  討論

　　3．1  檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

　　精密稱取干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解配成標(biāo)準(zhǔn)溶液,，對(duì)苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描,，結(jié)果表明標(biāo)準(zhǔn)溶液在200 nm處有zui大吸收，考慮紫外吸收末端干擾大,，且樣品中苦參堿含量高,，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。

　　3．2  流動(dòng)相的選擇

　　選擇了3種流動(dòng)相：（1）乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液（1∶9）,，氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.0,；（2）乙腈-0.005 mol/L庚烷基磺酸鈉溶液（25∶75）,；（3）乙腈-甲醇-磷酸鹽溶液（25∶10∶65）。經(jīng)多次測(cè)試結(jié)果表明,，流動(dòng)相（1） 峰分離不好,，流動(dòng)相（2）的峰型不好，出現(xiàn)脫尾現(xiàn)象,，流動(dòng)相（3）出峰時(shí)間合理,，峰型好，分離度大于1.5,。

　　3．3  萃取次數(shù)的考察

　　取洗劑5 ml,，加濃氨試液調(diào)pH＝10后，分別用氯仿（30,、30,、30、20,、20,、20 ml）提取3,、4,、5、6次,，合并提取液,，揮干氯仿，加甲醇適量溶解殘?jiān)?，濾過(guò),，濾渣，容器用甲醇洗滌3次,，每次5 ml,，合并洗液與濾液，定量轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶中,，用流動(dòng)相稀釋至刻度,，通過(guò)比較峰面積，5次萃取基本可將苦參堿萃取*,。