人抗小反芻獸疫抗體（PPR）ELISA試劑盒說明書

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：人抗小反芻獸疫抗體（PPR）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于定性測定人血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中抗小反芻獸疫抗體（PPR）,。

實驗原理

本試劑盒采用間接法測定標本中人抗小反芻獸疫抗體（PPR）,。用純化的小反芻獸疫PPR）抗原包被微孔板,，制成固相抗原，與樣品中抗小反芻獸疫抗體（PPR）溫育后,，加入生物素標記的抗IgG抗體,，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，與CUTOFF值相比較,，從而判定標本中人抗小反芻獸疫抗體（PPR）的存在與否。,，

試劑盒組成

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟

1.         編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔,、陽性對照2孔,、空白對照1孔

2.         加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照50μl,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,，37℃溫育45分鐘,。

3.         配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

4.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)4次,，拍干。

5.         加生物素標記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl,。37℃溫育30分鐘

6.         洗滌：操作同4,。

7.         加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。

8.         洗滌：操作同4。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.     測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

結(jié)果判定：

  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為人小反芻獸疫抗體（PPR）陰性

  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人小反芻獸疫抗體（PPR）陽性

注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行,，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

4．  封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

5．底物請避光保存。

6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,，使用雙波長檢測時,，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸,，使用時必須注意安全。

規(guī)格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃,。

2．有效期：6個月

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