人抗絲集蛋白抗體（AFA）ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供研究使用,。

藥品名稱(chēng)：

通用名：人抗絲集蛋白抗體（AFA）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于定性測(cè)定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中抗絲集蛋白抗體（AFA）,。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒采用間接法測(cè)定標(biāo)本中人抗絲集蛋白抗體（AFA）,。用純化的絲集蛋白（AFA）抗原包被微孔板，制成固相抗原,，與樣品中抗絲集蛋白抗體（AFA）溫育后,，加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,，形成免疫復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中人抗絲集蛋白抗體（AFA）的存在與否,。，

試劑盒組成

標(biāo)本要求

1．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性,。

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟

1.         編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔,、空白對(duì)照1孔

2.         加樣：分別在陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl,。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻，37℃溫育45分鐘。

3.         配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

4.         洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)4次，拍干,。

5.         加生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl,。37℃溫育30分鐘

6.         洗滌：操作同4。

7.         加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。

8.         洗滌：操作同4,。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.     測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

結(jié)果判定：

  試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10

  臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為人絲集蛋白抗體（AFA）陰性

  陽(yáng)性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人絲集蛋白抗體（AFA）陽(yáng)性

注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,，本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4．  封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

5．底物請(qǐng)避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),，參考波長(zhǎng)為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸,，使用時(shí)必須注意安全。

規(guī)格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6個(gè)月

廈門(mén)慧嘉生物科技有限公司專(zhuān)業(yè)代理眾多生命科學(xué)領(lǐng)域的,。致力于各種ELISA試劑盒、免疫組化試劑盒,、一抗二抗,、細(xì)胞因子、生物試劑,、移液器,、耗材的銷(xiāo)售推廣及服務(wù)工作。
咨詢(xún)：     http://www.biohj.com

人抗絲集蛋白抗體（AFA）ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)