檢測風(fēng)疹病毒抗體IgG（RUVAb-IgG） 

    [測定方法]  ELISA法

    [方法學(xué)原理]  在微孔表面包被純化的風(fēng)疹病毒抗原,。被稀釋過的患者血清加入微孔中。如存在風(fēng)疹病毒抗體IgG可與微孔上抗原相結(jié)合,。然后洗去未結(jié)合物質(zhì),，再加入酶聯(lián)液，與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合,。洗去過量的酶聯(lián)液,。zui后加入底物和色原（顯色液）。在特定時間終止酶聯(lián)液的催化反應(yīng),。所產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度與標(biāo)本中風(fēng)疹病毒抗體IgG含量呈正相關(guān),。通過酶標(biāo)儀與校正和對照相比，讀出結(jié)果,。

    [標(biāo)本準(zhǔn)備]  靜脈抽血2ml,，不抗凝。

    [試劑]

    1．微孔板

    2．樣品稀釋液

3．HRP-抗人IgG酶結(jié)合物

4．陰性對照

    5．陽性對照

    6．洗滌劑

    7．TMB顯色液

    [儀器設(shè)備]  酶標(biāo)儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀,。

    （測定步驟）

    1．吸取5ul血清標(biāo)本加入250u1標(biāo)本稀釋液中,，做1：51稀釋。

    2．吸取100ul稀釋過的血清,、陽性對照,、陰性對照和校正液（不稀釋），加入微孔板內(nèi),，設(shè)空白對照1孔,。振蕩，混勻,，去除孔內(nèi)液體中氣泡,，室溫環(huán)境中孵育20min。

    3．棄去孔內(nèi)液體,，用洗滌液洗5次,。

    4．每孔再加入100t~l酶聯(lián)結(jié)合物，室溫環(huán)境中孵育20min,。

    5．棄去孔中酶聯(lián)液,，用洗滌液洗5次。

    6．每孔加入100u1 TMB顯色液,，室溫環(huán)境中孵育10min。

    7．每孔加入100ul終止液,，終止反應(yīng),，充分混勻。

    8．用酶標(biāo)儀（波長為450nm）讀取吸光度,。以待測樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽性,。

    [注意事項(xiàng)]

    1．整個檢測過程應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊和生物安全守則規(guī)定，嚴(yán)防交叉污染,。

    2．所有樣品,、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

    3．試劑應(yīng)保存于2—8℃冰箱，使用前應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min,。

    4．洗滌時各孔均應(yīng)加滿洗滌液,，防止孔內(nèi)有游離酶未洗凈，每次洗板后均應(yīng)在吸水紙上拍干,。

    5．血標(biāo)本應(yīng)分離出血清保存,，2～8℃可保存?d，冷凍保存可至6個月,，避免反復(fù)凍融,。   

    6．試劑在儲存或使用過程中，禁止過熱,、曝曬或強(qiáng)光,。

    [正常參考值]  RUV Ab-IgG陰性

    [臨床意義]  風(fēng)疹病毒為呼吸道傳播，人類普遍易感,，育齡期婦女風(fēng)疹抗體陰性率各地報(bào)道不一,，為0～12．4％。

    一般認(rèn)為它主要引起青少年輕度發(fā)病,，約70％為顯性感染,，表現(xiàn)為斑丘疹、發(fā)熱,、淋巴結(jié)腫大,、白細(xì)胞升高，為自限性疾病,。但母體感染,，可通過胎盤傳給胎兒，引起先天性風(fēng)疹病毒感染,，此病可誘發(fā)胎兒發(fā)生慢性心臟病,、生長遲緩、肝脾大,、畸形和其他異常癥狀,。若為CRS患兒，則病死率較高,，尤其是出生

后頭幾個月,，出生1年內(nèi)死亡者可達(dá)10％～20％。嬰兒出生可無癥狀,，也可在以后發(fā)育中出現(xiàn)異常,。的血清學(xué)方法檢測育齡婦女血清狀態(tài)對于減少此類并發(fā)癥具有重要意義。若血液中存在風(fēng)疹病毒抗體,，可抵抗此種病毒感染,；缺乏此類抗體,，可通過接種疫苗而獲得?？贵w效價(jià)升高,，說明是急性風(fēng)疹病毒感染，并有助于與其他皰疹病毒區(qū)別,。風(fēng)疹病毒感染的孕婦應(yīng)留意可導(dǎo)致胎兒先天性感染的危險(xiǎn),。

    RUV Ab-IgM抗體在疹后5—14d陽性率zui高，此后檢出率下降,，有報(bào)道zui晚疹后66d仍陽性,。患先天性風(fēng)疹綜合征患兒IgM抗體陽性持續(xù)時間更長,，持續(xù)1年者占50％,，持續(xù)1～2年者占5％～10％。IgM抗體陽性,，表示患者近期感染,。因此，測定血清中風(fēng)疹IgM抗體,，對于風(fēng)疹早期診斷以及決定患風(fēng)疹的孕婦是否需要終止妊娠非常重要,。須注意的是，風(fēng)疹再感染者雖少數(shù)能查到IgM抗體,，但滴度低,，持續(xù)時間短；風(fēng)疹病毒活疫苗接種后,，絕大多數(shù)也能測出IgM抗體,。

風(fēng)疹患者測出RUV Ab—IgM抗體的同時，幾乎均可檢出RUVAb—IgG抗體,，并持續(xù)升高,，1～2個月內(nèi)仍有所上升，以后逐漸下降,，·4～12個月降低至基線水平,，抗體持續(xù)時間可達(dá)數(shù)年至數(shù)十年，甚至終身,?；謴?fù)期血清比急性期血清的抗體滴度有4倍或4倍以上升高，可作出近期風(fēng)疹感染的診斷,。測定風(fēng)疹IgG抗體，可以了解人群風(fēng)疹隱性感染水平和考核疫苗的免疫效果,。