生物芯片法檢測(cè)解脲脲原體

    解脲脲原體是zui小,、zui簡(jiǎn)單的原核生物，球桿狀，直徑<150gm,，細(xì)胞內(nèi)有1環(huán)狀DNA分子、游離的RNA及核糖體,，缺少線粒體,、溶酶體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等各種細(xì)胞器,。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)解脲脲原體引起的泌尿生殖系感染并不少見(jiàn)。解脲支原體寄生于患者或帶菌者的尿道和陰道黏膜,，一般通過(guò)性接觸而被感染,；嬰兒出生時(shí)可由產(chǎn)道獲得，甚少宮內(nèi)感染,。臨床上常采用生物芯片技術(shù)對(duì)解脲脲原體抗體進(jìn)行檢測(cè),。

    [檢測(cè)方法]  生物芯片法

    [方法學(xué)原理]  以微孔濾膜為載體，利用微陣列技術(shù)將純化的解脲脲原體（Uu）I群,、Ⅱ群特異性蛋白固定于同一膜片上,，并利用微孑L濾膜的滲濾、濃縮,、凝集作用,，使抗原抗體反應(yīng)在固相膜上快速進(jìn)行，再以免疫膠體金作為標(biāo)記物直接在膜上顯色,。顯色后的芯片放人芯片識(shí)別儀,，在軟件的支持下對(duì)不同點(diǎn)陣的灰度值進(jìn)行分析。

    [標(biāo)本準(zhǔn)備]  取新鮮末梢血或靜脈血,。如采血后24h內(nèi)不能進(jìn)行試驗(yàn),，分離血清后將其保存于一20℃環(huán)境中。檢測(cè)時(shí),，使樣本恢復(fù)至室溫,。

    [試劑]

    1．蛋白芯片

    2．試劑A（洗滌液）

    3．試劑B（金溶膠試劑）

    [儀器]  蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)

    [檢測(cè)步驟]

    1．在芯片上標(biāo)記樣品編號(hào)。

    2．在芯片盒窗口內(nèi)滴加4滴試劑A,，使膜表面*浸濕,。

    3．待*滲入后，室溫環(huán)境下放置lmin,，加待檢血清100~1,。

    4．待血清*滲入后，滴加6滴試劑5．待試劑B*滲入后,，滴加6滴試劑

    6．反應(yīng)完畢后30min內(nèi),，將芯片放人餅片閱讀系統(tǒng)進(jìn)行分析。

    [結(jié)果判斷]

    檢測(cè)結(jié)果1：Uul群,、Uu 2群均為陰性,，提示沒(méi)有被感染。

    檢測(cè)結(jié)果2：Uul群陽(yáng)性,、Uu 2群陰性,，提示被Uul群感染。

    檢測(cè)結(jié)果3：Uu 2群陽(yáng)性、Uul群陰性,，提示被Uu 2群感染,。

    檢測(cè)結(jié)果4：Uu 1群和Uu 2群均為陽(yáng)性，提示被Uu感染,，并且是復(fù)合感染,。

    [正常參考值]  解脲脲原體陰性

    [注意事項(xiàng)]

    1．從2～8℃環(huán)境取出的芯片須在室溫環(huán)境下平衡至少lOmin后方可使用。

    2．采取血樣時(shí)患者無(wú)須禁食,。

    3．新鮮血樣在2—8℃環(huán)境下存放不要超過(guò)48h,；長(zhǎng)期保存的樣本應(yīng)在一20℃以下環(huán)境中凍存，避免反復(fù)凍融,。

    4．芯片反應(yīng)窗口中的膜不能損傷或受潮,。

    5．芯片應(yīng)在有效期內(nèi)使用。若陽(yáng)性控制點(diǎn)不顯色說(shuō)明芯片已失效,，換新的芯片重做,。

    6．殘余的標(biāo)本與使用過(guò)的芯片盒按生物危險(xiǎn)晶進(jìn)行消毒處理。

    7．操作時(shí)要戴手套,，檢測(cè)完畢*洗手,。

    8．如不慎讓任何試劑接觸眼部，立即用大量清水沖洗,。

    [臨床意義]  解脲脲原體（Uu）分為兩大群14型,，第l群為1、3,、6、14型,，占UU感染的90％-92％,；第2群為2、4,、5,、7、8,、9,、10、13型,，占UU感染的8％～10％,。UU不侵入組織和血液，只能黏附于泌尿生殖道的上皮細(xì)胞表面,，從細(xì)胞膜獲得脂質(zhì)和膽固醇,，引起細(xì)胞損傷，并且解脲脲原體中的脲酶可以水解尿素產(chǎn)生大量的氨，對(duì)細(xì)胞有毒害作用,。同時(shí)可吸附于精子表面,，阻礙精子的運(yùn)動(dòng)。其產(chǎn)生的神經(jīng)氨酸酶樣物質(zhì)可干擾精子與卵子的結(jié)合,，引起不育不孕,；還可引起尿道結(jié)石；也可通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒,，引起流產(chǎn),、早產(chǎn)、死胎,。