抗甲狀腺球蛋白抗體TGA的檢測(cè)方法

    甲亢,、慢性甲狀腺炎、甲減具有自身免疫病的性質(zhì),。在這些疾病的患者中,，常可測(cè)出循環(huán)抗甲狀腺抗體,，如抗甲狀腺球蛋白抗體（thyroglobulinantibodyTGA）,、抗甲狀腺微粒體抗體（thyromicrosomalantibodyTMA）、抗第二膠原抗體,、抗甲狀腺細(xì)胞膜抗體,、甲狀腺刺激抗體。前二者在臨床實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用zui廣,，診斷價(jià)值也較大,。

    應(yīng)用RIA檢測(cè)TGA敏感性甚高，且現(xiàn)已有試劑盒供應(yīng),，操作簡(jiǎn)便,、快速，樣品可直接測(cè)定,。但由于條件所限,，目前常用的還是IFF和ELISA法,。在純化TG的基礎(chǔ)上，進(jìn)行ELISA法則具有敏感,、特異,、快速、簡(jiǎn)便,、可批量檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn),。特介紹如下。

    1．甲狀腺球蛋白的純化  將手術(shù)摘除的甲狀腺洗凈,，—30℃凍存,，取出后在凍結(jié)狀態(tài)下用刀削成薄片，加2倍量生理鹽水于4~C浸泡過(guò)夜（切勿攪拌）,。收集浸液,，同法再浸泡1次。將2次浸液合并,，加硫酸銨使達(dá)37％飽和度,，4℃靜置1～2h，離心除去沉淀,。上清內(nèi)繼續(xù)加硫酸銨使達(dá)42％飽和度,，4~C靜置2h，2000r／rain離心20rain,，收集沉淀物,，溶于0．01mol／L，pH7．2PBS中,，即為粗提TG,。將粗提TG用SephadexG-200柱作凝膠過(guò)濾，PBS洗脫,，收集*蛋白峰,，混合，即為純化的TG,。如疑殘留有白蛋白,，可再流穿抗人全血清-Sepharose4B親和層析柱。

    2．操作步驟  用純化TG（10—50pg／mL）包被聚苯乙烯微孔板,，每孔0．1mL,，37~C1h后，4℃過(guò)夜,；洗滌（每次3min,，共3次，以下同）后加1：10稀釋待測(cè)血清,，每孔0．1mL,，設(shè)復(fù)孔,。37％，2h（或45cC,，1h）后洗滌,；每孔加HRP標(biāo)記的TG（zui適工作濃度用方陣法滴定）0．ImL，37~C,，2h（或45℃,，1h）后洗滌；每孔加OPD-U202底物0,，lmL,，37~C避光反應(yīng)15—20min顯色后，加0．05mL2mol／LH2S04終止反應(yīng),。目測(cè)呈色程度，或用酶標(biāo)儀檢測(cè)492nm吸光度,，計(jì)算復(fù)孔均值,。

    3．結(jié)果觀察  目測(cè)呈色深淺與標(biāo)準(zhǔn)品孔比較，判定是否為陽(yáng)性,。P／N值大于或等于2．1判為陽(yáng)性,。

    4．臨床意義  血清TGA是診斷甲狀腺自身免疫疾病的一個(gè)特異性指標(biāo)。大約60％甲亢,，80％—90％慢性甲狀腺炎患者TGA表現(xiàn)為強(qiáng)陽(yáng)性,。TGA陽(yáng)性者傾向于診斷為慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎，而較少考慮甲狀腺腫瘤,，故可作為甲狀腺腫塊的鑒別,。

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