抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）測(cè)定

    血管炎系指以血管壁（主要是動(dòng)脈）發(fā)炎和壞死為基本病理所引起的一組疾病,。

    近年來(lái)認(rèn)識(shí)到抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（anti-neutrophil cytoplasmic antibody,，ANCA）是存在于血管炎患者血清中的自身抗體，是診斷血管炎的一種特異性指標(biāo),。采用間接免疫熒光法（1f了）,，可將ANCA分為胞漿型（C-ANCA）、核周型（P-ANCA）和不典型ANCA（X-ANCA）,。

    C—ANCA的靶抗原是髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase,，MPO）、彈性蛋白酶（elastase）,、組織蛋白酶C（cathepsin G）,、溶菌酶、乳肝褐素（1actoferrin）,，在所有ANCA陽(yáng)性血清中約占40％,。X-AN-CA或P-ANCA的靶抗原是乳肝褐素、溶菌酶,、β葡萄糖苷酸酶（β-glucoronidase）,、組織蛋白酶G。

    ANCA的檢測(cè)方法有許多種,，包括IFF,、RIA、ELISA,、Western印跡法,、斑點(diǎn)印跡法及免疫沉淀試驗(yàn)等。方法為IFF,，至今仍作為ANCA篩檢的“金指標(biāo)”,。在用IFF法檢測(cè)ACNA的同時(shí)進(jìn)行ELISA的檢測(cè)將有助于疾病的動(dòng)態(tài)觀察；靶抗原PR3或MPO的分辨將有助于某些特發(fā)性壞死性血管炎或壞死性腎小球腎炎的確診,。Gross等（1993）作了ANCA和有關(guān)疾病的分析,。陳素英等（1996）以IFF法檢測(cè)ANCA并對(duì)其與170例疾病的相關(guān)性作了報(bào)道。現(xiàn)介紹IFF檢測(cè)ANCA,。

    1．操作步驟

    （1）用肝素抗凝血分離白細(xì)胞,，以0．01mol／L，pH7．4PBS液洗滌，制成細(xì)胞基質(zhì)片,，用95％乙醇固定5min,。

    （2）將1：20稀釋的血清標(biāo)本滴加于底物片上，濕盒內(nèi)37~C孵育30min,。

    （3）再將基質(zhì)片分為三組,，分別滴加1：10稀釋的FITC-羊抗人IgG、IgA和IgM,，37~C孵育30min,，洗滌3次。

    （4）加2：1緩沖甘油封片,，置熒光顯微鏡下觀察,。

    2．結(jié)果觀察  C-ANCA：熒光將胞漿勾劃出清晰分葉核輪廓；P-ANCA：熒光集中核周?chē)纬森h(huán)狀,，或不規(guī)則塊狀,；X-ANCA：表現(xiàn)為彌漫的胞漿熒光。

    3．注意事項(xiàng)  由于乙醇固定的基質(zhì)片上抗核抗體（ANA）陽(yáng)性血清易表現(xiàn)為P-ANCA假陽(yáng)性,，因此應(yīng)采用多聚甲醛固定以分辨是否ANA與ANCA共存,。

    4．臨床意義  C-ANCA是診斷多發(fā)性肉芽腫（Weaner’s granulomatosis，WG）非常敏感的指標(biāo),，也少見(jiàn)于微小多動(dòng)脈炎（microscopic polyarteritis,，MPA），Churg-Strauss綜合征,、經(jīng)典的結(jié)節(jié)性多發(fā)性動(dòng)脈炎,。P-ANCA見(jiàn)于腎性血管炎，急性進(jìn)行性腎小球腎炎（rapidly pro-Gressive lomemlonephritis,，PRGN）,，風(fēng)濕性和膠原性血管疾病。X-ANCA或P-ANCA見(jiàn)于潰瘍性結(jié)腸炎,，自身免疫性肝炎,，原發(fā)性硬化膽管炎。

    陳素英等檢測(cè)的結(jié)果指出,，ANCA在風(fēng)濕病患者血清中陽(yáng)性率為70．0％,，與ANA和抗組蛋白（histone）有交叉重疊現(xiàn)象。在風(fēng)濕病患者中,，ANCA不僅存在于SLE中,，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及皮肌炎患者的血清也可出現(xiàn)ANCA陽(yáng)性。在腎臟疾病中,，ANCA陽(yáng)性率為72．85％,，其分布較廣泛,，多見(jiàn)于新月體腎小球腎炎、紫癜性腎炎,、IsA腎病和局灶節(jié)段性腎小球硬化,，但也可見(jiàn)于微小病變性腎病、急性間質(zhì)腎炎,、腎小球終末期病變等疾病中,。

因此，不能以ANCA陽(yáng)性而確診為局限于腎臟MPA或壞死性腎小球腎炎,，腎組織學(xué)檢查仍*,。

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