ELISA試劑盒酶的底物

    HRP的底物

　　HRP催化過氧化物的氧化反應(yīng),，代表性的過氧化物為H2O2,，其反應(yīng)式如下：

　　DH2+ H2O2 D+ H2O

　　上式中,，DH2為供氧體,，H2O2為受氫體,。在ELISA中,，DH2一般為無色化合物,，經(jīng)酶作用后成為有色的產(chǎn)物，以便作比色測定。常用的供氫體有鄰苯二胺（O-phenylenediamine,OPD）,、四甲基聯(lián)苯胺（3,3,5,5-tetramethylbenzidine,TMB）和ABTS[2,2-azino-di-（3-ethylbenziazobine sulfonate-6）],。

　　OPD氧化后的產(chǎn)物呈橙紅色，用酸終止酶反應(yīng)后,，在492nm處有zui高吸收峰,，靈敏度高，比色方便,，是HRP結(jié)合物zui常用的底物,。OPD本身難溶于水，OPD·2HCL為水溶性,。曾有報(bào)道OPD有致異變性,，操作時(shí)應(yīng)予注意。OPD見光易變質(zhì),，與過氧化氫混合成底物應(yīng)用液后更不穩(wěn)定,，須現(xiàn)配置現(xiàn)用。在試劑盒中,，OPD和H2O2一般分成二組分,，OPD可制成一定量的粉劑或片劑形式，片劑中含有發(fā)泡助溶劑,，使用更為方便,。過氧化氫則配入底物緩沖液中，有制成易保存的濃縮液,，使用時(shí)用蒸餾水稀釋,。*的ELISA試劑盒中則直接配成含保護(hù)劑的工作濃度為0.02% H2O2的應(yīng)用液,只需加入OPD后即可作為底物應(yīng)用液。

　　TMB經(jīng)HRP作用后共產(chǎn)物顯藍(lán)色,，目視對(duì)比鮮明,。TMB性質(zhì)較穩(wěn)定，可配成溶液試劑,，只需與H2O2溶液混和即成應(yīng)用液,，可直接作底物使用。另外,，TMB又有無致癌性等優(yōu)點(diǎn),，因此在ELISA中應(yīng)用日趨廣泛。酶反應(yīng)用HCL或H2SO4終止后,，TMB產(chǎn)物由藍(lán)色呈黃色,，可在比色計(jì)中定量，zui適吸收波長為405nm,。

　　ABTS雖不如OPD和TMB敏感,，但空白值極低,，也為一些試劑盒所采用。

　　另一種HRP的底物為3-（4-羥基）苯丙酸[3-（4-hydroxy）phenly propionic acid,HPPA],，經(jīng)HRP作用后,，產(chǎn)物顯熒光，可用熒光光度計(jì)測量,。用于ELISA的優(yōu)點(diǎn)為可加寬定量測定的線性范圍,。

　　HRP對(duì)氫受體的專一性很高，僅作用于H2O2,、小分醇的過氧化物和尿素過氧化物（urea peroxide）,。H2O2應(yīng)用zui多，但尿素過氧化物為固體,，作為試劑較H2O2方便,、穩(wěn)定。試劑盒供應(yīng)尿素過氧化物片劑,，用蒸餾水溶解后,，在底物緩沖液中密閉、低溫（2～8℃）可穩(wěn)定1年,。

    AP的底物

　　AP為磷酸酯酶,，一般采用對(duì)硝基苯磷酸酯（p-nitrophenyl phosphate,p-NPP）作為底物，可制成片劑,，使用方便,。產(chǎn)物為黃色的對(duì)硝基酚，在405nm波長處有吸收峰,。用NaOH終止酶反應(yīng)后,，黃色可穩(wěn)定一時(shí)間。

　　AP也有發(fā)熒光底物（磷酸4-甲基傘酮）,，可用于ELISA作熒光測定,，敏感度較高于用顯色底物的比色法。

廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)提供各品牌ELISA試劑盒
詳情請(qǐng)登入: http://www.biohj.com
http://www.biohj.com/product.aspx?cid=1 

查詢,，或    ：[email protected]