ELISA的試劑盒的固相載體

    固相載體在ELISA測定過程中作為吸附劑和容器,，不參與化學(xué)反應(yīng)?？勺?/span>ELISA中載體的材料很多,，zui常用的是聚苯乙烯,。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性,，加之它的價(jià)格低廉,，所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料,，可制成各種形式,。

    ELISA載體的形狀主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管,。以微量滴定板zui為常用,，于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板，上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式,。為便于作少量標(biāo)本的檢測,，有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的，放入座架后,，大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同,。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測，并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果?，F(xiàn)在已有多種自動化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測,，包括加樣、洗滌,、保溫,、比色等步驟，對操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利,。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,，其吸附性能特別是對免疫球蛋白的吸附性能增加，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,，但用于間接法測抗體時(shí)空白值較大,。

    良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好，空白值低,，孔底透明度高,，各板之間、同一板各孔之間,、同一板各孔之間性能相近,。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,，因此,，每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體,，保溫后洗滌,，加底物顯色，終止酶反應(yīng)后,，分別測每孔溶液的吸光度,。控制反應(yīng)條件,，使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右,。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,，應(yīng)小于10%,。

    與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。作為ELISA固相載體,，聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可剪割,，價(jià)廉,，但光潔度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整,。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,，但空白值也略高。

    為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣,，可應(yīng)用如下的試驗(yàn)：用其他免疫學(xué)測定方法選出一個(gè)典型的陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本,，將它們進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測定,，然后比較結(jié)果,。在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大，這種載體就是這一ELISA測定項(xiàng)目的zui合適的固相載體,。

    在ELISA中,，用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加,。ELISA板孔的吸附面積約為200mm2,，小珠均為1000mm2，將近ELISA板孔的5倍,。吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加,。再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點(diǎn)的暴露面處于*反應(yīng)狀態(tài),，因此珠式ELISA的反應(yīng)往往更為靈敏,。小珠的另一特點(diǎn)是更易于使洗滌*，使用特殊的洗滌器,，使小珠在洗滌過程中滾動淋洗,，其洗滌效果遠(yuǎn)較板孔的浸泡式為好,。但由于磨砂工藝的難度較大，小珠的均一性較差,。

    小試管作為固相載體也有較大的吸附表面,，而且標(biāo)本的反應(yīng)量也相應(yīng)增加。板式及珠式ELISA的標(biāo)本量一般為100-200ul,，而小試管可根據(jù)需要加大反應(yīng)體積,，標(biāo)本反應(yīng)量的增加有助于試驗(yàn)敏感性的提高。小試管還可以當(dāng)作比色杯,，zui后直接放入分光光度計(jì)中比色,。

　　也有應(yīng)用聚苯乙烯膠乳或其他材料制成的微粒作為ELISA固相載體的。其優(yōu)點(diǎn)是表面積極大,，反應(yīng)在懸液中進(jìn)行,，其速率與液相反應(yīng)近似。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體,，反應(yīng)后用磁鐵的吸引進(jìn)行分離,，洗滌方便，試劑盒一般均配以特殊儀器,。

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