人流行性乙腦IgM抗體（JE IgM）ELISA試劑盒使用說明書

                            本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：人流行性乙腦IgM 抗體（JE IgM）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：

    本試劑盒定性測定人血液,、或其它相關(guān)組織中流行性乙腦IgM 抗體（JE IgM）

實驗原理：

    本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標本中人流行性乙腦IgM 抗體（JE

IgM）。用純化的流行性乙腦IgM  抗原包被微孔板，制成固相抗原,，可與樣品中人流行性乙

腦IgM 抗體（JE   IgM）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP 標記的流行

性乙腦IgM 抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。

TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標儀在450nm

波長下測定吸光度（OD 值）,，與CUTOFF 值相比較，從而判定標本中人流行性乙腦IgM 抗

體（JE IgM）的存在與否,。

試劑盒組成：

  1   20 倍濃縮洗滌液         50ml×1 瓶  7      終止液                      6ml×1 瓶

  2   酶標試劑              6ml×1/瓶      8   標準品（陽性對照）                0.5ml×1 瓶

  3   酶標包被板             12 孔×8 條  9      標準品稀釋液（陰性對照） 0.5ml×1 瓶

  4   樣品稀釋液             6ml×1 瓶      10  說明書                      1 份

  5   顯色劑A 液            6ml×1 瓶      11  封板膜                      2 張

  6   顯色劑B 液            6ml×1 瓶      12  密封袋                      1 個

標本要求：

    1．標本處理：血清,、血漿標本可直接檢測

    2．標本按要求制備后盡早進行實驗。如不能及時檢測,，可將標本在-20℃保存一個月,，

       但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    3．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性,。

操作步驟：

1.  編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔,、陽性對照2 孔,、空白對照1

    孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.  加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照（標準品）50μl。然后在待測

    樣品孔先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，

    盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，

3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4.  配液：將20 倍濃縮洗滌液加蒸餾水至1000ml 后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去,，如此

    重復(fù)5 次，拍干,。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7.  溫育：操作同3,。
8.  洗滌：操作同5,。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

    15分鐘

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應(yīng)在加終止

    液后15 分鐘以內(nèi)進行。

結(jié)果判定：

    試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;  陰性對照平均值≤0.10

    臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

    陰性判定：樣品OD 值<          臨界值（CUT OFF）者為人流行性乙腦IgM 抗體（JE IgM）陰性

    陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為人流行性乙腦IgM 抗體（JE IgM）陽性

注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行,，本試劑不同批號組分不得混用,。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

   用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

5．底物請避光保存,。

6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時,，參考波長為630nm

7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M  的硫酸,，使用時必須

   注意安全,。

規(guī)格：

     96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6 個月

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