ELISA測定的常用模式六--固相捕獲法測IgM抗體
 

    在病原體急性感染的診斷中,，通常需檢測IgM抗體，如急性甲型肝炎診斷的血清抗HAVIgM檢測,、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM檢測和TORCH項目的系列IgM檢測等,。IgM抗體也有使用間接法測定的，如目前在市場上可見到的有些TORCH系列的IgM檢測試劑盒,。在使用間接法測IgM抗體時,，由于臨床血清樣本中含有高濃度的IgG抗體，其中部分特異IgG抗體將與IgM抗體競爭與固相抗原結(jié)合,，從而干擾IgM抗體的檢測。

    因此,，在使用間接法測定IgM抗體時,，通常須將血清樣本用抗人IgG抗體或SPA預(yù)處理，以去除IgG的干擾,。這樣不但測定較為繁瑣,，而且影響測定的特異性和靈敏度。目前,，常用的IgM抗體檢測方法為捕獲法,，即以抗人IgM抗體（抗人u鏈）作為固相抗體，當加入血清標本時,，其中的IgM類抗體（特異的和非特異的）即可被固相抗體捕獲,，再加入特異抗原，其與固相上捕獲的IgM抗體結(jié)合后,，加入酶標抗特異抗原的抗體,，zui后加入底物顯色,。具體操作步驟如下：

    1．首先將抗人IgMbt鏈抗體于碳酸鹽緩沖液中40c下過夜包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗體,，洗滌去除未與固相結(jié)合或結(jié)合不緊的抗體后,，用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉，洗滌去除未結(jié)合的部分及雜質(zhì),。

    2．加入含待測IgM抗體的臨床樣本如血清等,，溫育一定時間后洗板；此時,，待測樣本中的IgM抗體就會與固相上的抗P鏈抗體反應(yīng)而吸附于固相上,。

    3．加入特異的抗原如HAV抗原、HBcAg等,，溫育一定時間后洗板,；此時，特異抗原就會與固相上的特異IgM抗體發(fā)生反應(yīng),。

    4．加入酶標記的抗特異抗原的抗體,，溫育一定時間后洗板；此時,，在固相上即形成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物,。

    5．加入酶底物，溫育顯色測定（圖2—10）,。

    本方法要著重注意的是RF（1gM類）及其他非特異IgM的干擾,。RF（1gM類）由于其能與固相抗人u鏈抗體結(jié)合，并可與隨后加入的酶標抗體（動物IgG）反應(yīng),，從而導(dǎo)致假陽性反應(yīng),。而非特異IgM由于其在*步溫育中，可與特異IgM競爭與固相抗體結(jié)合,，所以會影響測定的靈敏度,。因此，使用本法測IgM,，必須對臨床樣本進行適當稀釋,。樣本稀釋后，上述產(chǎn)生干擾作用的非特異IgM含量減少,，而特異IgM由于處于相應(yīng)病原體的急性感染期,，滴度很高，一定稀釋后,，不會有明顯影響,，況且，在某些病原體如HBV的慢性感染階段,，IgM類特異抗體也能持續(xù)存在,，只不過滴度要低很多,。

    因此，如不對血清樣本稀釋,，就直接檢測,，即使是沒有非特異IgM的干擾，陽性測定結(jié)果也沒有急性感染的診斷價值?，F(xiàn)在,，有些試劑生產(chǎn)廠家，為了迎合臨床實驗室減輕勞動強度,、簡便操作的要求,，生產(chǎn)了不需對樣本進行稀釋的抗HAVIgM和抗HBclgMELISA試劑盒，現(xiàn)有不少實驗室也在使用,。鑒于上面提到的原因,，我們建議臨床實驗室在做抗HAVIgM和抗HBc lgM等類檢測時，應(yīng)使用對樣本進行稀釋的試劑盒,，以保證檢測的臨床價值,。

更多ELISA試劑盒，請登入

http://www.biohj.com/product.aspx?cid=112    http://www.biohj.com
查詢或[email protected]     :   ：  

廈門慧嘉生物科技有限公司    歡迎與我們,！