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一,、凝膠制備

1.微波爐溶解瓊脂糖時(shí)，膠液沸騰沖溢出三角錐瓶微波爐加熱時(shí)膠液可能發(fā)生劇烈沸騰,，

    1）總液體量不宜超過(guò)三角錐瓶的 50% 容量,，

    2）2% 以上膠液設(shè)置中火加熱

    3）膠液劇烈沸騰時(shí)，停止加熱,，移開(kāi)三角錐瓶,，請(qǐng)戴上防熱手套，小心搖動(dòng)三角錐瓶,，然后再次加熱,，膠液沸騰直至膠液清澈，保證瓊脂糖*溶解,。

2.瓊脂糖電泳圖像背景模糊不清

瓊脂糖沒(méi)有*溶解會(huì)造成電泳圖像背景模糊不清,。 *溶解的瓊脂糖膠液清澈，三角錐瓶?jī)?nèi)壁應(yīng)沒(méi)有粘附瓊脂糖顆粒,。

3.加熱后水分蒸發(fā),，如需要應(yīng)加入熱的蒸餾水，補(bǔ)足到原來(lái)的重量,，搖勻,。

二、 電泳

1.DNA 條帶模糊,，拖尾

   1） DNA 降解,。避免核酸酶污染。

   2）DNA 上樣量過(guò)多,。減少凝膠中 DNA 上樣量,。

   3） 電泳緩沖液陳舊: 電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低， pH 值上升,，緩沖能力減弱,，從而影響電泳效果。建議經(jīng)常更換電泳緩沖液,。

   4）電泳條件不合適,。電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過(guò) 20V/cm ，溫度＜30 ℃ ,巨大 DNA 鏈,，溫度應(yīng)＜15 ℃,，核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力。

   5）DNA 樣含鹽過(guò)高,。泳前通過(guò)乙醇沉淀去除過(guò)多的鹽。

   6）有蛋白污染,。電泳前抽提去除蛋白,。

   7）DNA 變性。電泳前勿加熱,，用 20mM NaCl 緩沖液稀釋 DNA ,。

2.DNA 條帶淡弱或無(wú) DNA 帶

   1）DNA 的上樣量不夠：增加 DNA 的上樣量。

   2）DNA 降解：避免 DNA 的核酸酶污染,。

   3）DNA 走出凝膠：縮短電泳時(shí)間,，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度,。

   4）分子大小相近的 DNA 帶不易分辨,。增加電泳時(shí)間，使用正確的凝膠濃度,。

   5）DNA 變性：電泳前請(qǐng)勿高溫加熱 DNA 鏈,，用 20mM NaCl Buffer稀釋DNA 。

   6）DNA 鏈巨大,，常規(guī)凝膠電泳不合適,。在脈沖凝膠電泳上分析。

3.DNA MARKER 條帶扭曲

   1）配制凝膠的緩沖液和電泳緩沖液不是同時(shí)配制的,。使用同時(shí)配制的緩沖液,。電泳時(shí)緩沖液高過(guò)液面1 － 2mm 即可。

   2）電泳時(shí)電壓過(guò)高,?？梢栽陔娪厩?15 分鐘用較低電壓 (3V/cm), 等條帶出孔后，再調(diào)電壓,。

   3）盡量慢慢加樣 ,等樣品自然沉降后再加電壓,。