一,、流動相的PH應在使用的范圍內(nèi)
由于流動相的PH 控制不當而對色譜柱造成的損害,,通常很難使色譜柱恢復,因此必須認真對待,,嚴格控制流動相的PH值,。
二、去除樣品和流動相中的固體顆粒
樣品和流動相中含有的固體顆粒物質(zhì)會堵塞色譜柱篩板,,篩板被堵住不僅會引起柱壓的升高,,而且也會引起柱效下降,因為篩板的堵塞會引起液流不均,,導致色譜峰型拖尾,、變寬,從而使柱效下降,。因此,,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析樣品前對樣品進行針筒過濾,,流動相過0.45μm濾膜,。
三、使用保護柱或在線過濾器
樣品和流動相經(jīng)過濾后并不能*消除固體顆粒物質(zhì),,因為泵的磨損,、密封圈和管路的老化也會產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì),這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱,,堵塞篩板,,導致柱壓升高、柱效下降,。保護柱和在線過濾器上都有篩板,,其孔徑與色譜柱孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達色譜柱,,有效防止色譜柱篩板的堵塞,。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例,,因此,除對樣品和流動相進行過濾外,,建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器,。
如果色譜柱柱壓升高是由于進樣端篩板被堵引起的,可選擇一下方式進行補救:
1,、先在色譜柱前加上保護柱或在線過濾器,,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min,。
2,、先在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器,然后反向使用,。
四,、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑,,因此緩沖鹽使用不當會使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,,使填料板結(jié),,柱壓上升;同時阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,,使色譜柱的保留能力下降,,柱效降低。緩沖鹽析出后,,去除非常困難,,因此,正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要,。
五,、防止強保留物質(zhì)在色譜柱上存留
強保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積,對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為,,不僅引起峰型變寬,、拖尾,使柱效下降,,同時也會引起保留時間的變化,,累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由于強保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應,,需要一定的時間才會體現(xiàn)出來,,但對許多藥品特別是復雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強保留物質(zhì),,因此要防止強保留物質(zhì)的累積,,需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。
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