一,、流動(dòng)相的PH應(yīng)在使用的范圍內(nèi)
由于流動(dòng)相的PH 控制不當(dāng)而對(duì)色譜柱造成的損害,通常很難使色譜柱恢復(fù),,因此必須認(rèn)真對(duì)待,,嚴(yán)格控制流動(dòng)相的PH值。
二,、去除樣品和流動(dòng)相中的固體顆粒
樣品和流動(dòng)相中含有的固體顆粒物質(zhì)會(huì)堵塞色譜柱篩板,,篩板被堵住不僅會(huì)引起柱壓的升高,而且也會(huì)引起柱效下降,,因?yàn)楹Y板的堵塞會(huì)引起液流不均,,導(dǎo)致色譜峰型拖尾、變寬,,從而使柱效下降,。因此,建議使用超純水和色譜純?cè)噭?,在分析樣品前?duì)樣品進(jìn)行針筒過(guò)濾,,流動(dòng)相過(guò)0.45μm濾膜。
三,、使用保護(hù)柱或在線過(guò)濾器
樣品和流動(dòng)相經(jīng)過(guò)濾后并不能*消除固體顆粒物質(zhì),,因?yàn)楸玫哪p、密封圈和管路的老化也會(huì)產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì),,這些固體顆粒被流動(dòng)相帶入色譜柱,,堵塞篩板,導(dǎo)致柱壓升高,、柱效下降。保護(hù)柱和在線過(guò)濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱孔徑相同,,因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱,,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例,,因此,,除對(duì)樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾外,建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線過(guò)濾器,。
如果色譜柱柱壓升高是由于進(jìn)樣端篩板被堵引起的,,可選擇一下方式進(jìn)行補(bǔ)救:
1、先在色譜柱前加上保護(hù)柱或在線過(guò)濾器,,然后用甲醇,、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。
2,、先在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線過(guò)濾器,,然后反向使用。
四,、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水,,難溶于有機(jī)溶劑,因此緩沖鹽使用不當(dāng)會(huì)使其析出,,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,,使填料板結(jié),柱壓上升,;同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低,。緩沖鹽析出后,,去除非常困難,因此,,正確的使用緩沖鹽對(duì)延長(zhǎng)色譜柱使用壽命非常重要,。
五、防止強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱上存留
強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積,,對(duì)樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為,,不僅引起峰型變寬、拖尾,,使柱效下降,,同時(shí)也會(huì)引起保留時(shí)間的變化,累積到一定程度時(shí)還會(huì)導(dǎo)致柱壓升高,。由于強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物對(duì)色譜分離的影響是一個(gè)累積效應(yīng),,需要一定的時(shí)間才會(huì)體現(xiàn)出來(lái),,但對(duì)許多藥品特別是復(fù)雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強(qiáng)保留物質(zhì),,因此要防止強(qiáng)保留物質(zhì)的累積,,需要在每天的日常維護(hù)中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。
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