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一、試驗(yàn)儀器 
PCR儀和紫外凝膠成像系統(tǒng)（紫外分析儀或手提紫外等）以及移液器都可能影響PCR檢測(cè)的質(zhì)量,。PCR儀是控制PCR反應(yīng)溫度變化的,，其溫度和控制時(shí)間的準(zhǔn)確程度可能會(huì)影性PCR檢測(cè)質(zhì)量。移液器取液的準(zhǔn)確程度影響反應(yīng)體系是否能達(dá)到*反應(yīng)環(huán)境,。紫外分析系統(tǒng)對(duì)檢測(cè)敏感性有明顯的影響,。紫外分析系統(tǒng)有3種類(lèi)型儀器：紫外分析儀、紫外凝膠成像系統(tǒng),、手提紫外燈,。紫外分析儀直接用眼睛觀察瓊脂糖凝膠上DNA擴(kuò)增帶。紫外凝膠成像系統(tǒng)是在計(jì)算機(jī)上通過(guò)攝像系統(tǒng)對(duì)瓊脂糖凝膠上DNA擴(kuò)增帶進(jìn)行觀察,。手提紫外燈可以在電泳過(guò)程中直接對(duì)瓊脂糖凝膠上DNA擴(kuò)增帶進(jìn)行觀察,，使用方便，分辨率比較低,。依據(jù)這些儀器的分辨率由高到低順序是紫外分析儀,、紫外凝膠成像系統(tǒng)、手提紫外燈,。紫外分析儀有時(shí)能看到弱陽(yáng)性擴(kuò)增帶,，在紫外凝膠成像系統(tǒng)上卻看不到。手提紫外燈只有在陽(yáng)性擴(kuò)增帶比較亮?xí)r才能看到,，建議為保證檢測(cè)質(zhì)量不用手提紫外燈,，可用于臨時(shí)的電泳結(jié)果觀察。 
儀器的質(zhì)量控制應(yīng)該通過(guò)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量認(rèn)證來(lái)實(shí)施,，定期進(jìn)行儀器的效驗(yàn),。沒(méi)有質(zhì)量認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室可以定期請(qǐng)儀器生產(chǎn)廠(chǎng)家進(jìn)行效驗(yàn)和保養(yǎng)，確保所有儀器處于正常的工作狀態(tài)。 

二,、試驗(yàn)試劑與耗材 
在PCR檢測(cè)質(zhì)量控制中,，試劑的選擇具有十分重要的作用，也是實(shí)驗(yàn)人員zui為關(guān)注的檢測(cè)質(zhì)量控制因素,。試劑一定選擇質(zhì)量和信譽(yù)好的廠(chǎng)商,，一但選定后不要輕易改換。如果必須改換時(shí)應(yīng)與原產(chǎn)品進(jìn)行嚴(yán)格比對(duì)試驗(yàn),，包括敏感性,、特異性、試劑保存期等試驗(yàn),。并且經(jīng)常要注意不同批次產(chǎn)品質(zhì)量的差異,。比如說(shuō)TaqDNA聚合酶，不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的質(zhì)量是有差異的,，盡管都是標(biāo)出相同活性單位,，但其標(biāo)定方法和保存液的成分以及運(yùn)輸過(guò)程的不同常常導(dǎo)致實(shí)際活性單位是有差異的，有時(shí)由于其活性低,，使得弱陽(yáng)性樣品漏檢,；有時(shí)由于其活性過(guò)高出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。這與ELISA檢測(cè)中酶結(jié)合物的作用相似,。其實(shí)影響PCR檢測(cè)結(jié)果的試劑很多,，可以這樣說(shuō)，PCR檢測(cè)用的所有試劑都可能影響檢測(cè)效果,?？刂圃噭┑馁|(zhì)量是作好PCR檢測(cè)前提。我們認(rèn)為：是選擇PCR試劑盒來(lái)控制試劑質(zhì)量,。 
評(píng)價(jià)一種PCR試劑盒,，除了考慮它的敏感性、特異性,、穩(wěn)定性,、操作簡(jiǎn)便程度外，還應(yīng)包括：試劑盒提供的試劑覆蓋整個(gè)PCR檢測(cè)試驗(yàn)的程度,。如果試劑盒提供了整個(gè)PCR檢測(cè)試驗(yàn)的試劑,，表明該試劑盒對(duì)PCR檢測(cè)試驗(yàn)的試劑具有了全程控制性能。相反,，PCR檢測(cè)的試劑的質(zhì)量控制程度比較低,，意味著檢測(cè)質(zhì)量可控程度低。例如：溴化乙錠僅僅起熒光染料的作用,，如果在陽(yáng)光下長(zhǎng)時(shí)間的照射下失效了,，在紫外燈下發(fā)熒光效能降低，可能會(huì)造成一些弱陽(yáng)性樣品的漏檢，出現(xiàn)假陰性,。其它試劑出現(xiàn)問(wèn)題也是一樣影響檢測(cè)質(zhì)量,。試劑盒在生產(chǎn)過(guò)程中，有一套試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制體系,。每一試劑組分都經(jīng)過(guò)靈敏度,、敏感性、特異性質(zhì)量控制的檢測(cè),，在有效期內(nèi)能確保每種試劑的質(zhì)量,。因此,，選擇試劑盒進(jìn)行PCR檢測(cè)是比較理想的控制方法,。在PCR檢測(cè)中，全部使用試劑盒提供試劑,，對(duì)PCR檢測(cè)質(zhì)量控制有益,。 
實(shí)驗(yàn)耗材也是影響PCR檢測(cè)質(zhì)量的因素之一。PCR反應(yīng)管薄厚以及傳導(dǎo)熱量性能等直接影響PCR檢測(cè)效果,。在熱蓋PCR儀上一般不需要加入礦物油,，但有些PCR反應(yīng)管蓋子不嚴(yán)密，導(dǎo)致擴(kuò)增過(guò)程中反應(yīng)液水份蒸發(fā),，嚴(yán)重影響檢測(cè)靈敏度,。PCR反應(yīng)體系是微量的，移液器的Tip頭生產(chǎn)質(zhì)量不好時(shí),，有時(shí)致使液體殘留量多或洪吸作用強(qiáng),，導(dǎo)致試劑盒中試劑量不夠，配置PCR反應(yīng)體系不準(zhǔn),，造成檢測(cè)質(zhì)量下降,。 
在每次PCR檢測(cè)時(shí)，一定設(shè)立陰性對(duì)照樣品和陽(yáng)性對(duì)照樣品,。陰性對(duì)照樣品檢測(cè)為陰性時(shí),，表明試驗(yàn)全部過(guò)程的試劑沒(méi)有受到污染；陽(yáng)性對(duì)照樣品檢測(cè)為陽(yáng)性時(shí),，表明DNA提?。≧NA提取、RNA反轉(zhuǎn)錄）,、DNA擴(kuò)增和電泳鑒定工作體系正常,。在陰性對(duì)照樣品和陽(yáng)性對(duì)照樣品檢測(cè)結(jié)果成立的前提下，才能對(duì)檢測(cè)樣品進(jìn)行判定,。因此,，每次試驗(yàn)都應(yīng)設(shè)立表明DNA提取（RNA提取、RNA反轉(zhuǎn)錄）,、DNA擴(kuò)增和電泳鑒定對(duì)照,，只有設(shè)立試驗(yàn)全程的對(duì)照，才能證明試驗(yàn)結(jié)果成立,。這一點(diǎn)對(duì)PCR和RT-PCR檢測(cè)試驗(yàn)是非常重要的,。 
陽(yáng)性對(duì)照在試劑盒中是必須有的組分。設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照有3種類(lèi)型：*種是用檢測(cè)的病原微生物作為陽(yáng)性對(duì)照,。這樣的直接對(duì)照優(yōu)點(diǎn)是直觀,、準(zhǔn)確、本次試驗(yàn)完整條件對(duì)照,，可以說(shuō)明此次試驗(yàn)是否成立,。缺點(diǎn)是對(duì)檢測(cè)過(guò)程中增加了PCR污染的指數(shù)。另外,，不能表明每個(gè)檢測(cè)樣品對(duì)照成立,。第二種是設(shè)立一種與檢測(cè)病毒無(wú)關(guān)微生物作為陽(yáng)性對(duì)照。優(yōu)點(diǎn)是降低了PCR污染的危險(xiǎn)性,，并且提高了試劑盒的生物安全性,。缺點(diǎn)是僅是參考陽(yáng)性對(duì)照，不夠直接,、*反映本次試驗(yàn)成立,，也不能表明每個(gè)檢測(cè)樣品對(duì)照成立?？蛇m合怕污染的實(shí)驗(yàn)室或要求生物安全等級(jí)高的病原微生物的檢測(cè),。第三種是在每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)設(shè)立參考對(duì)照，除了陽(yáng)性擴(kuò)增帶之外,，又設(shè)立一條擴(kuò)增帶,，指示每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)檢測(cè)情況。檢測(cè)為陽(yáng)性時(shí)出現(xiàn)兩條不同大小擴(kuò)增帶,，陰性時(shí)出現(xiàn)一條擴(kuò)增帶,。這種對(duì)照設(shè)立技術(shù)要求高，成本也高些,，對(duì)照效果是的,，可以排除每個(gè)檢測(cè)樣品操作失誤或試劑出現(xiàn)問(wèn)題對(duì)檢測(cè)造成的影響。由于在一個(gè)反應(yīng)管內(nèi)對(duì)兩條模板同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增,，相互之間多少有一定的干擾,，因此，對(duì)病原微生物檢測(cè)靈敏度或多或少有一定影響,。此種對(duì)照方式可能會(huì)成為PCR對(duì)照的發(fā)展趨勢(shì),。 

三,、人員操作 
我們多名實(shí)驗(yàn)室人員曾經(jīng)對(duì)相同樣品同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果確實(shí)存在差異,。經(jīng)常檢測(cè)人員比其他實(shí)驗(yàn)人員檢測(cè)的靈敏度高10~100倍,。說(shuō)明PCR檢測(cè)的試驗(yàn)確實(shí)有一定的操作技術(shù)需要熟悉和訓(xùn)練，不同的人員對(duì)檢測(cè)結(jié)果有一定的影響,。加強(qiáng)人員的操作技能的訓(xùn)練是必須的,，需要實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員對(duì)PCR檢測(cè)有一個(gè)熟練的過(guò)程。 
PCR污染控制是PCR檢測(cè)操作人員必須非常注意一項(xiàng)內(nèi)容,。實(shí)驗(yàn)室設(shè)置上分配液區(qū),、模板提取區(qū)、擴(kuò)增區(qū),、電泳區(qū),。物流應(yīng)按分配液區(qū)、模板提取區(qū),、擴(kuò)增區(qū),、電泳區(qū)順序，嚴(yán)禁倒流,。人員操作也應(yīng)非常注意，比如注意經(jīng)常打掃衛(wèi)生消毒,、對(duì)移液器要定期進(jìn)行清洗,、消毒。及時(shí)試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便,、快速,、準(zhǔn)確等。