那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于蛋白質(zhì)檢測的具體概述：
蛋白提取
蛋白樣品提取是蛋白定量和分析的基礎(chǔ),。天然蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu),、化學(xué)性能各異，選擇適當?shù)募毎呀庖褐苽涞鞍讟悠分陵P(guān)重要,。選擇細胞裂解液時,，除了要考慮蛋白產(chǎn)量，還要考慮所選擇的一抗的是否能識別線性的抗原表位,。一些含有十二烷基硫酸鈉（SDS）和強離子去污劑（如脫氧膽酸鈉等）的蛋白質(zhì)裂解液能夠從組織或細胞中提取出大量的蛋白質(zhì),，適用于PAGE，Western blot等檢測,；但由于這類裂解液易使蛋白變性，因而不適于共沉淀（Co-IP）等實驗,。當使用某些只能識別非變性的抗原表位的抗體時,，應(yīng)該選擇不含去垢劑或含有較溫和的非離子去污劑（如NP-40，Triton X-100等）的裂解液,，而不能使用含有SDS和強離子去垢劑的蛋白質(zhì)裂解液,。
蛋白濃度測定
確定蛋白樣品濃度對許多實驗都是至關(guān)重要的,。通常大多數(shù)蛋白樣品的濃度可以通過比色測定法定量。根據(jù)一些特殊化學(xué)試劑與蛋白質(zhì)結(jié)合發(fā)生顏色變化的原理,，使用分光光度計或酶標儀檢測特定波長下的吸光值,，通過與蛋白標準品進行比較，可以換算出樣品中的蛋白含量,。Bradford蛋白質(zhì)定量試劑（Cat. No. E161-01）具有靈敏度高,、簡便快速、價格低廉的特點,；BCA蛋白質(zhì)定量試劑（Cat. No. E162-01）可提供更高的靈敏度和準確性,，而且不受去垢劑的影響，更適宜微量蛋白的測定,。
蛋白質(zhì)電泳和Western blot
蛋白質(zhì)電泳是分離,、鑒定蛋白質(zhì)分子量和濃度的重要方法，尤其是聚丙烯酰胺凝膠電泳（Po l yac r y lamide Ge l Electrophoresis,，PAGE）,。丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺可聚合形成具有分子篩效應(yīng)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)聚合物，作為電泳時的固相支持物,。進行非變性PAGE（Native PAGE）時,，蛋白質(zhì)在電泳過程中保持完整的狀態(tài)，并依三種因素分開：分子量大小,、形狀和所帶電荷,。變性PAGE（SDS-PAGE）中，添加了作為變性劑和助溶劑的陰離子去垢劑SDS,。SDS一方面可以打開蛋白質(zhì)分子內(nèi)和分子間的氫鍵,，破壞蛋白質(zhì)的二級和三級結(jié)構(gòu)，消除蛋白質(zhì)間形狀上的差異,；另一方面可以和解聚后的氨基酸側(cè)鏈按比例結(jié)合,，使得蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物所帶的負電荷大大超過蛋白質(zhì)本身的電荷量，消除了蛋白質(zhì)間的電荷差異,。因此,，在SDS-PAGE中，蛋白質(zhì)在電場下的遷移速率只和其分子量大小相關(guān),。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于蛋白質(zhì)檢測的具體概述,。
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