那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于分子篩(凝膠過濾層析)蛋白純化系統(tǒng)的優(yōu)缺點:
分子篩定義:
分子篩層析,又稱為凝膠過濾層析或體積排阻層析,。分子篩層析是利用有一定孔徑范圍的多孔凝膠作為固定相,,對混合物中各組分按分子大小進行分離的層析技術(shù)。具有分子篩作用的物質(zhì)很多,,如浮石,、瓊脂、瓊脂糖,、聚乙烯醇,、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等,。
避開原因一:工藝放大困難
分子篩層析無法遵循線性放大原則,,即使遵循柱床高度不變的原則,工藝流速如何進行調(diào)整,,也是需要面臨的問題,。為保證良好的分離效果,,分子篩層析需要求相對較高的裝填高度,然而裝填高度偏高,,反壓也勢必會偏高,。由于層析填料的耐壓有限,在保證不超壓的前提下,,工藝流速會明顯受限,,這會使得整個純化過程時間漫長。
避開原因二:層析柱裝填困難
在進行層析柱裝填時,,勻漿液濃度需要在一定的范圍內(nèi)(50%-70%),,方可保證沉降均勻、柱效良好,,這對層析柱的規(guī)格選型有著特殊要求,。高度100 cm的層析柱,在勻漿濃度50%-70%時,,假設(shè)壓縮系數(shù)為1.15,,則實際使用高度為43.5-60.9 cm,這往往無法達到某些使用者的要求,。若選配裝柱器,,并考慮柱頭所占空間,這要求實驗空間需高度充足,。若考慮將2根層析柱串聯(lián)使用,,則要求2根層析柱的柱效相當(dāng),才可保證分離效果良好,,這對裝填技術(shù)也有著較高要求,。
避開原因三:測定柱效困難
常規(guī)柱效測定方法,要求平衡1.5-2 CV,,進樣后,,洗脫至出峰(參考值:2 CV),流速30 cm/h,。若假設(shè)裝填高度為60 cm,,平衡、洗脫體積總計3.5 CV,,經(jīng)計算,,測定一次柱效,需耗時7小時,??梢韵胂螅?dāng)發(fā)現(xiàn)柱效不理想,,需要重新裝填并測定柱效時,,過程是很繁瑣,、耗時的。
避開原因四:維護保養(yǎng)操作困難
當(dāng)層析柱使用完畢,,用20%乙醇保存時,,同樣也很耗時。而且當(dāng)再次使用時,,用水將20%乙醇置換走,,一般需要3 CV以上,而且由于該過程反壓較大,,通常還需要降低流速進行,。
總之,采用分子篩層析,,各個環(huán)節(jié)都很繁瑣,、耗時,因此,,在進行層析工藝設(shè)計時,,要盡量避開分子篩層析,。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于分子篩(凝膠過濾層析)蛋白純化系統(tǒng)的優(yōu)缺點,。
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