Gemini胎牛血清選擇指南

Gemini胎牛血清使用方法

         在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，經(jīng)常加入5%-20%的Gemini胎牛血清,，常使用的Gemini胎牛血清濃度是10%,。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜，影響 后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中使用10%的Gemini澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞,，效果非常好。但是有些細(xì)胞也會(huì)使用5%的Gemini胎牛血清或者20%的Gemini胎牛血清,，要根據(jù)具體細(xì)胞選擇 合適的Gemini胎牛血清濃度,。

Gemini胎牛血清保存方法

1,、需要長(zhǎng)期保存的Gemini牛血清，例如Gemini南美胎牛血清,，必須儲(chǔ)存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中,。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1個(gè)月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾 濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)被破壞,，而影響血清質(zhì)量,。如果一次無(wú)法用完一瓶,可將40～45ml分裝于無(wú)菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,， 必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选?/span>

2,、一般廠商提供的血清為無(wú)菌,無(wú)需再過(guò)濾除菌。如發(fā)現(xiàn)Gemini牛血清有懸浮物,例如Gemini北美胎牛血清中發(fā)現(xiàn)有懸浮物,，則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過(guò)濾,切勿直接過(guò)濾血清,。

3、瓶裝Gemini胎牛血清南美解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,一般以50ml無(wú)菌離心管可分裝40～ 45ml,。在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉 淀,。

4,、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀 物顯著增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。

5,、血清中的沉淀物和絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理,。 顯微鏡下 "小黑點(diǎn)":經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染,。一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng), 但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的血清,。

Gemini胎牛血清使用中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題總結(jié)

一、血清滅活問(wèn)題,。

1,、問(wèn)：加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎？

答：不是必須的,，看做什么實(shí)驗(yàn)了,，我在使用Gemini南美血清的時(shí)候，都不滅活,。

2,、問(wèn)：Gemini胎牛血清新西蘭（Gemini新西蘭血清）滅活是56℃ 30分鐘嗎？

答：如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞,，血清一般是不需要滅活的,，例如經(jīng)常使用Gemini新西蘭胎牛血清，是不用熱滅活的,，這樣可以有效保存血清中的生長(zhǎng)因子,。但是如果用于培 養(yǎng)一些表面具有補(bǔ)體受體的細(xì)胞,，如內(nèi)皮細(xì)胞，血清是需要滅活,，一般是56℃,，30min。

3,、問(wèn)：我要做滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng),，Gemini北美胎牛血清要滅活嗎？

答：一般的細(xì)胞培養(yǎng)中使用到的Gemini胎牛血清,，例如Gemini ES胎牛血清是不用滅活的,。如果一定需要滅活，可以直接購(gòu)買Gemini胎牛血清澳洲熱版本,，進(jìn)口Gemini澳洲胎 牛血清熱滅活的一般都已滅活,。

4、問(wèn)：我用病毒上清轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎,？因?yàn)檠逯锌赡苡行┭a(bǔ)體和抗體，是不是會(huì)影響轉(zhuǎn)染,？我想未滅活的血清中含些抗體補(bǔ)體可能會(huì)和病毒相結(jié)合,，影響 轉(zhuǎn)染，正確嗎,？細(xì)胞是單核細(xì)胞白血病細(xì)胞,，病毒是病毒包裝細(xì)胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無(wú)血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí),，目的是什么,？

答：血清一定要滅活，可以先用無(wú)血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí)以后再加血清,。避免雜蛋白對(duì)病毒和宿主結(jié)合過(guò)程的干擾,，一般是2-6小時(shí)，根據(jù)細(xì)胞的狀態(tài)決定,。血清不一定需 要滅活,，滅活的目的是將血清中的補(bǔ)體滅活！這要根據(jù)實(shí)際情況而定,，如果沒(méi)有把握那就滅活吧,，也不麻煩56度半個(gè)小時(shí)。

5,、問(wèn)：(1)我買的是Gemini胎牛血清北美,，要滅活嗎？有些說(shuō)法是需要,，有些說(shuō)直接解凍后就可以加入到培養(yǎng)基中,；我配制胰蛋白酶液,，用的是D-PBS，有關(guān)系嗎,？

答：關(guān)于血清的熱滅活,，是很多人感興趣也存在一定爭(zhēng)議的話題。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室將血清的熱滅活還是作為常規(guī)來(lái)執(zhí)行,，因?yàn)橛袃蓚€(gè)作用,，一是滅活補(bǔ)體，第二是滅活血清中可能 存在的支原體,。但是實(shí)驗(yàn)者并沒(méi)有考慮熱處理對(duì)血清中的生長(zhǎng)因子,、氨基酸等成分帶來(lái)的負(fù)面影響。

我在實(shí)驗(yàn)室處理Gemini胎牛血清新西蘭的時(shí)候,，有一次水浴箱在滅活過(guò)程中出現(xiàn)故障,，溫度升高到80℃，血清變成了凝膠狀,，我重新處理了另外一份Gemini胎牛血清南美,，將兩 份血清對(duì)比，發(fā)現(xiàn)高溫直接影響到血清所含的抗體蛋白,。在56℃下滅活半小時(shí)以上,，肯定也會(huì)對(duì)里面的蛋白起到破壞作用。下次有機(jī)會(huì)我做個(gè)延長(zhǎng)滅活時(shí)間的實(shí)驗(yàn)試試,，看看到底有多大的 影響,。熱滅活之后,，血清放在四度冰箱久了,，就會(huì)有沉淀產(chǎn)生，這常常會(huì)被認(rèn)為是微生物污染或者是黑膠蟲(chóng)污染,。為了驗(yàn)證到底有沒(méi)有污染,，常常又會(huì)把血清放置37℃溫育，但是血清中的 蛋白會(huì)進(jìn)一步析出,，后還是要做鏡檢,，無(wú)菌培養(yǎng)試驗(yàn)，和革蘭氏染色試驗(yàn),，非常麻煩,。

我看過(guò)一份資料，里面提到70%的實(shí)驗(yàn)者認(rèn)為滅活是理所當(dāng)然的,。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,，而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等。其中常用的手法是56℃熱處理30分 鐘,。隨著血清采集,、處理,、加工工藝的提高，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立,，只有少數(shù)對(duì)血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性,。有人比較過(guò)11 個(gè)不同細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對(duì)6 個(gè)細(xì)胞株(HBAE,，MDBK,，Vero，成纖維細(xì)胞,，MRC-5)的生長(zhǎng)帶來(lái)負(fù)面影響,，三個(gè)細(xì)胞株(FOX-NY，MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響,，而只有兩個(gè)細(xì)胞 株(Balb/3T3,，Sp2/0Ag14 hybrid)，在熱滅活之后,，細(xì)胞生長(zhǎng)有輕微的改善,。所以，在正常的操作下,，熱滅活通常對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有明顯的促進(jìn)作用,。

你可以摸索一下，Gemini北美血清從-20℃冰箱拿出來(lái)之后在常溫解凍,，然后混勻分裝成兩份,，一份滅活，一份不滅活,，比較這兩種Gemini北美血清對(duì)細(xì)胞是否有影響,。 然后再確定是滅活還是不滅活。這個(gè)過(guò)程多也就一個(gè)星期,。同時(shí)你還要考慮血清滅活與否對(duì)你后續(xù)的實(shí)驗(yàn)有沒(méi)有影響,。

問(wèn)：(2)分裝后的Gemini澳洲血清血清從-20℃取出放4℃讓其液化，卻見(jiàn)Gemini澳洲血清血清比較混濁,，有沉淀產(chǎn)生,，這屬正常嗎？

答：正常,。

二,、Gemini胎牛血清的保存問(wèn)題。

1,、問(wèn)：2016年6月到期的Gemini胚胎干細(xì)胞（Gemini ES血清16141079）胎牛血清到2017年5月還能用嗎,？

答：只有試試了，如果一直在-20℃凍著來(lái)者,，應(yīng)該還可以,，先少用點(diǎn)看看,。養(yǎng)細(xì)胞系應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題，原代不行,。

2,、問(wèn)：請(qǐng)問(wèn)我自然溶化好的Gemini澳洲血清和1640培養(yǎng)基今天用不上，明天用,，我不想放到冰箱里,，放在室溫下一晚行嗎？100毫升培養(yǎng)瓶加多少培養(yǎng)基呢,？

答：可以放4℃,。4-5ml。

3,、問(wèn)：4℃冰箱內(nèi)保存3個(gè)月的Gemini南美血清,，能否繼續(xù)使用？相關(guān)細(xì)胞和其它試劑的代價(jià)比較高,，不敢輕易嘗試,。

答：需要長(zhǎng)期保存的Gemini胎牛血清必須要保存在-20至-70℃的低溫冰箱中，4℃冰箱中保存時(shí)間不要超過(guò)1個(gè)月,。

三,、Gemini牛血清滅活時(shí)溫度問(wèn)題。

1,、問(wèn)：因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室水浴鍋失控,，血清滅活時(shí)，溫度到了61.7℃,，這血清還能用嗎,？

答：多長(zhǎng)時(shí)間啊,？短時(shí)間應(yīng)該可以吧,，我有一次加熱了一個(gè)多小時(shí),，還照樣用,。

2、問(wèn)：我滅活Gemini胎牛血清時(shí),，用的電磁爐,，定在了70℃，本來(lái)說(shuō)調(diào)溫度到56℃再放血清的,，后來(lái)忘了,，就把血清放進(jìn)去了，所以滅活的溫度肯定超過(guò)56℃了,，不知道這樣對(duì) 血清有沒(méi)有影響,？

答：常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,，而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等，其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘,?？纯茨沭B(yǎng)的細(xì)胞是什么，一般的話估計(jì)問(wèn)題不大,，要是 很珍貴的細(xì)胞還是慎重一點(diǎn)啊,。熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì)， 在對(duì)補(bǔ)體滅活以外,，熱處理同時(shí)也對(duì)血清中可能存在的支原體具有滅活作用?，F(xiàn)在好像不主張熱滅 活，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來(lái)負(fù)面影響,，對(duì)血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生,，此外，有研究結(jié)果證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對(duì)細(xì)胞的促粘附作用,。

四,、FBS可否代替人AB型血清？

問(wèn)：我現(xiàn)在在做人的外周血b淋巴細(xì)胞的培養(yǎng),，文獻(xiàn)上要求用人的AB型血清,，但是我覺(jué)得很多代理商都沒(méi)有。我想FBS代替,，但不知道可否,，我先是擔(dān)心免疫排斥之類，但是我查了 些資料后,，應(yīng)該不會(huì)(我覺(jué)得),。但是我又不能夠TRY。因?yàn)榧?xì)胞因子確實(shí)太貴了,，所以咨詢一下,。謝謝！

答：你照文獻(xiàn)的做,。除非你系列實(shí)驗(yàn)證明你用代用品的結(jié)果與文獻(xiàn)的相同(你還是要用到文獻(xiàn)的試劑),。細(xì)胞培養(yǎng)的影響因素很多，特別是培養(yǎng)基的成分,。

五,、血清的制備方法問(wèn)題。

1,、問(wèn)：我的實(shí)驗(yàn)需要自己制備一些血清用于培養(yǎng)細(xì)胞,，有沒(méi)有人知道用于培養(yǎng)細(xì)胞的血清需要怎樣的制備過(guò)程？

答：自己制備血清當(dāng)心污染啊，我們一般不自己制備胎牛血清,，我們是購(gòu)買的Gemini牛血清,，Gemini新西蘭血清，效果非常好,，也很穩(wěn)定,。如果無(wú)菌條件好的話，用靜 置析出方法就行,。

2,、問(wèn)：一般我們用得Gemini胎牛血清用前還要滅活，我想用大鼠的血,，不知道要不要滅活,？

答：你直接把采來(lái)的血液在離心管里4℃過(guò)夜，離心,，取上清,，在無(wú)菌過(guò)濾，也可滅活,，然后分裝凍存,，用時(shí)再配。

3,、問(wèn)：如果滅活會(huì)不會(huì)對(duì)血清中的一些因子有損傷,？

答：加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮,，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在進(jìn)行免疫學(xué)研究,、培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和 平滑肌細(xì)胞時(shí),，推薦使用熱滅活血清,。滅活一般不會(huì)對(duì)血清中的一些因子損傷的。

六,、心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)Gemini牛血清的使用問(wèn)題,。

1、問(wèn)：在進(jìn)行心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí),，需要用含血清的培養(yǎng)基中止胰酶的消化作用,，我現(xiàn)在使用的是含血清10%的培養(yǎng)液,，但近日看北醫(yī)一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)的課件發(fā)現(xiàn),，有用1%血清培養(yǎng) 液進(jìn)行中止消化的，想問(wèn)一下,，1%的是否可以,，效果是否有保證,？這樣確實(shí)能節(jié)省不少血清的。

答：關(guān)于心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)的FBS問(wèn)題：

(1)1%的血清*培養(yǎng)基可不可以,，得看你胰酶的用量,。但是在心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)就不行。 10%的FBS*培養(yǎng)基效果都不太好,，開(kāi)始心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)需要高濃度的FBS,，20%左 右，但這就有出現(xiàn)另一個(gè)問(wèn)題,，在FBS*培養(yǎng)基中,，成纖維細(xì)胞呈優(yōu)勢(shì)細(xì)胞，須得在培養(yǎng)基加入適量的BrdU以抑制其生長(zhǎng),，純化心肌細(xì)胞,。

(2)FBS的作用不僅僅是拿來(lái)中和胰酶，只是FBS中的一些蛋白質(zhì)如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用,。

(3)元代心肌細(xì)胞培養(yǎng)的FBS使用,，有講究：剛開(kāi)始使用20%左右的高濃度的FBS，后逐漸遞減為無(wú)血清的DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng),。

2,、問(wèn)：我胰酶的用量是0.08% ，并混和了0.08%的膠原酶,。FBS要高濃度遞減是否是說(shuō)的在細(xì)胞培養(yǎng)中啊,，難道在消化時(shí)終止也需要如此高的濃度嗎，還有,，我的BRDU只用到48小 時(shí)就不用了,，因?yàn)閾?dān)心其損傷太大，可以持續(xù)用多久呢,？

答：我用10%FBS終止的,，然后差速1h，然后還是用10%FBS的HG-dmem養(yǎng)的,，沒(méi)有用brdu,，心肌細(xì)胞還是比較多和穩(wěn)定的，我第3天就可以用,，第2天晚上看就會(huì)有搏動(dòng),。

七、血清和培養(yǎng)基的種類及品牌問(wèn)題,。

1,、問(wèn)：細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清用哪個(gè)公司的產(chǎn)品比較好呢？周圍有人用PAA或Hyclone的，這兩種跟Gemini或sigma出品的差別大嗎,？

答：如果是長(zhǎng)得非?？斓眉?xì)胞如pa317，293,，c6等惡性腫瘤細(xì)胞,，一般得國(guó)產(chǎn)血清就可以，如果是原代培養(yǎng)的細(xì)胞,，應(yīng)用胎牛血清或類標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,，Hyclone公司血清的質(zhì) 量不如Gemini(同類血清)。國(guó)產(chǎn)的杭州四季青和甘肅民海（中美和資）不錯(cuò),。有些細(xì)胞(如：sf9,，293還有其他一些元代細(xì)胞)，用Gemini的比其他兩種好很多,，會(huì)大大加速試驗(yàn)進(jìn)度,。對(duì) 于其他一些細(xì)胞(如：vero，MDCK,，pk)四季青,，Hyclone的小牛血清足矣！另外,，Gemini的還要看產(chǎn)地,。

2、問(wèn)：近要訂一瓶Gemini北美血清,，實(shí)驗(yàn)室之前都在用小牛血清,，沒(méi)有買過(guò)Gemini胎牛血清。請(qǐng)問(wèn)哪個(gè)公司的好一些,？問(wèn)過(guò)試劑公司,，有兩種：一種是PAA的(分普通 級(jí)和優(yōu)級(jí))，一種是Hyclone的(只有普通級(jí),，而且是新西蘭產(chǎn)的),。試劑公司推薦使用PAA優(yōu)級(jí)的，但看好多文獻(xiàn)都用Hyclone的,，公司說(shuō)是因?yàn)楝F(xiàn)在Hyclone的都不是美國(guó)進(jìn)口的了,。請(qǐng)問(wèn)用 的哪種胎牛血清比較好？

答：民海的效果還不錯(cuò),，要是不放心國(guó)產(chǎn)的,，那就買進(jìn)口的。進(jìn)口的好多公司都有,，Gemini新西蘭血清的效果很好,。Hyclone和Gemini的都還可以,。民海的似乎比四季青的要好些 。復(fù)蒙的感覺(jué)也不錯(cuò),。

3,、問(wèn)：四季青“無(wú)噬菌體,、低內(nèi)毒素胎牛血清”與“無(wú)支原體胎牛血清”的區(qū)別,？培養(yǎng)腫瘤傳代細(xì)胞用哪一個(gè)比較好些？

答：用無(wú)支原體Gemini澳洲胎牛血清就可以啦,。

4,、問(wèn)：SKBR-3細(xì)胞培養(yǎng)用哪種型號(hào)的1640培養(yǎng)基及胎牛血清？

答：我一直用Gemini的1640,，你可以買含HEPES的1*10L的包裝,，胎牛血清也是用的Gemini，10%就行,。

八,、Gemini牛血清污染噬菌體的問(wèn)題。

1,、問(wèn)：有誰(shuí)知道小牛血清制造過(guò)程中怎樣能夠避免噬菌體的污染,，以及對(duì)已污染噬菌體的牛血清怎樣能夠除去噬菌體？

2,、問(wèn)：我也想知道,，我用的血清中大部分都有噬菌體，它對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)到底有什么影響,？

答：不知道您究竟使用的什么血清,，我們使用的Gemini胚胎干細(xì)胞血清，沒(méi)有任何噬菌體,。建議您立刻更換胎牛血清,，推薦您使用Gemini胎牛血清，具體的產(chǎn)品貨 號(hào)是：Gemini南美胎牛血清(Gemini南美血清),、Gemini北美胎牛血清（Gemini北美血清）,、Gemini澳洲胎牛血清（Gemini血清）、Gemini新西蘭胎牛 血清（Gemini新西蘭血清）,、Gemini ES胎牛血清（Gemini胚胎干細(xì)胞血清）,。

九、培養(yǎng)基血清濃度問(wèn)題,。

問(wèn)：在1640里加血清時(shí)加多了,，90ml里加了20ml Gemini新西蘭血清，約為18%,，以前都是加10ml的,，查了網(wǎng)上多建議用10%-15%,，有關(guān)系嗎？

答：我認(rèn)為一般來(lái)說(shuō)血清濃度的較大波動(dòng)對(duì)細(xì)胞的狀態(tài)影響較大,，建議再加90ml1640調(diào)成10%,。血清濃度大當(dāng)然細(xì)胞狀態(tài)感覺(jué)要好，但是高濃度的Gemini澳洲血清可能改 變細(xì)胞的基因表達(dá)譜,，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,。10%的濃度培養(yǎng)鼻煙癌細(xì)胞很好。

十,、問(wèn)：MTT加藥的時(shí)候加不加血清,？加藥時(shí)要用無(wú)血清的培養(yǎng)基嗎？

答：我的藥就是用含Gemini澳洲胎牛血清的培養(yǎng)基稀釋的,，不含血清的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞有毒性或抑制作用,，無(wú)形中對(duì)細(xì)胞造了一個(gè)serum-free的模型，細(xì)胞在提內(nèi)本來(lái)就是有血清 供應(yīng),，如果該藥物都不能對(duì)抗,，那該藥物就沒(méi)有什么臨床價(jià)值了，這是我的理解,。

十一,、PC12細(xì)胞培養(yǎng)所用血清問(wèn)題。

問(wèn)：我正準(zhǔn)備購(gòu)買上海細(xì)胞所的未分化的PC12細(xì)胞,，需要滅活的馬血清,，可現(xiàn)在買血清很困難，好像是海關(guān)有封鎖,，代理商這么說(shuō)的,，我原定購(gòu)買的Gemini的horse surum，現(xiàn)在 無(wú)法買到了,，好容易找到一個(gè)目前可以進(jìn)血清的公司Hyclone,，有一種Donor Equine serum是馬血清嗎？

答：Hyclone的Donor Equine serum可以用,，我以前用的就是這個(gè),。我當(dāng)時(shí)是在鼎國(guó)(重慶辦事處)買的，100ml大概140元,，具體不記得了,。當(dāng)時(shí)是看它比別的進(jìn)口的馬血清便宜 。另外：我買了以后滅活的,。

十二,、AB血清的制備問(wèn)題。

問(wèn)：本人想從人的外周血中分離AB血清的,，用于B淋巴細(xì)胞的培養(yǎng),。謝謝大家給點(diǎn)建議,。人的血，來(lái)之不易啊,。

答：是AB血型人的血清嗎,？這種血清即沒(méi)有抗A型抗原抗體，也沒(méi)有抗B型抗原抗體,。分離血清時(shí)將采集的血液注入試管中,，待血液凝固后離心分離血清?？蓪⒉杉难悍旁?7℃ 水浴箱中促進(jìn)血液凝固,，減少凝固時(shí)間,。離心可在2500～3000rpm,，10min，足可以分離血清,。分離后將血清吸出保存即可,。分離血清的量可按采集血液的50%左右計(jì)算，因?yàn)榧t細(xì)胞占總血 液的50%左右,。當(dāng)然整個(gè)過(guò)程要注意無(wú)菌操作,。

十三、Gibico的胎牛血清內(nèi)是否含糖,？

問(wèn)：我想做糖誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的試驗(yàn),。細(xì)胞培養(yǎng)液里加入了20%的胎牛血清。因此胎牛血清里是否含有糖對(duì)我實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)液糖終濃度影響比較大,。今天打電話問(wèn)Gemini公司的技術(shù)顧 問(wèn),，回答我糖濃度少于5μg/ml，因此基本可認(rèn)為是不含糖,。但我今天把胎牛血清送到我們醫(yī)院檢液科,，結(jié)果卻是：6.2mmmol/l(葡萄糖氧化酶法)。難道是檢測(cè)人血清的血糖濃度的方法 不能用于檢查牛血清嗎,？(另起茶水驗(yàn)?zāi)蚴录?檢驗(yàn)科沒(méi)有給我回答,。

答：應(yīng)該是不含糖的。我想我們肯定要以公司的說(shuō)明書為準(zhǔn),。至于為什么檢驗(yàn)科測(cè)起來(lái)有誤差,，我想可能是樣本不一樣，需要用標(biāo)志品矯正有關(guān),。具體需要檢驗(yàn)科的戰(zhàn)友解釋了,。

十四、血清或培養(yǎng)基產(chǎn)生了顏色或沉淀的問(wèn)題：

1,、問(wèn)：我用的是Gemini胎牛血清澳洲,，56℃30分鐘滅活后出現(xiàn)了白色少量絮狀沉淀,，是不是污染？還能不能再用,？血清的生產(chǎn)日期是2006年7月(現(xiàn)在是2007年6月11日),。

答：應(yīng)該問(wèn)題不大。你可以取少量血清放入培養(yǎng)皿中,，37℃過(guò)夜培養(yǎng)看看就知道是否污染了,。血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造 成,，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解凍后,，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,，并不影響血清本身的質(zhì)量。若您欲去除這些絮狀沉淀物 ,，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾,。

2,、問(wèn)：我用MTT法測(cè)細(xì)胞的增殖，用DMSO裂解細(xì)胞,，發(fā)現(xiàn)把DMSO加入到孔中就會(huì)形成乳白色(用的含胎牛血清的1640培養(yǎng)基,，由于沒(méi)有離板子的離心機(jī)，所以沒(méi)有去除培養(yǎng)基直接 加的DMSO),。以前用含小牛血清的培養(yǎng)基沒(méi)有看到有這種情況,。該怎么解決？

答：為什么要用離心機(jī)離心呢,？難倒你養(yǎng)的是懸浮細(xì)胞嗎,？如果是貼壁細(xì)胞的話直接將MTT倒掉，再加DMSO即可,，我們就是這么做的,，效果很好！并且測(cè)細(xì)胞的增殖的話如果不去 掉MTT就加DMSO的話誤差應(yīng)該很大,！有時(shí)不一定就是血清的原因,，可能跟你的MTT放置的時(shí)間或以及其他成分有關(guān)！

3,、問(wèn)：(1)Gemini胎牛血清500ml,，今天解凍后沒(méi)有混勻直接分裝，結(jié)果使得前面的幾管是清亮的,，后面就帶有棕色的,，不知有沒(méi)有影響,？估計(jì)有什么影響？前面的成分好還是棕 色的成分好??？

答：肯定有。還是重新混合重新分裝,，我覺(jué)得有效成分會(huì)集中在棕顏色部分,。

問(wèn)：(2)為什么會(huì)出現(xiàn)棕色呢？

答：血清中的棕色多一些可能是因?yàn)榧t蛋白的含量高些的緣故吧,。

問(wèn)：(3)血清滅活之后可以存放嗎,？我的是前天滅活的，但是沒(méi)有加到培養(yǎng)基里,，而是放在冰箱里,，那下次可以直接用嗎？還是再次滅活??？

答：當(dāng)然可以,，如果多的話,，分裝后放在－20℃，下次用時(shí)再解凍,，也不用再滅活,。用一管拿一管，少許血清可以放在4℃,。分裝時(shí)還要注意不要裝得太滿,，以免溢出污 染。

十五,、污染和過(guò)濾的問(wèn)題,。

1、問(wèn)：懷疑購(gòu)買的Gemini胚胎干細(xì)胞胎牛血清（Gemini ES胎牛血清）染菌,，想用濾膜過(guò)濾一下,，可否自己用0.22μm濾膜過(guò)濾？對(duì)血清性質(zhì)有多大影響,？有做過(guò)的么 ,？

答：可以過(guò)濾的，血清當(dāng)出廠時(shí)都是0.22μm或0.1μm過(guò)濾除菌,。想證明有沒(méi)有染菌不用過(guò)濾這么麻煩,，只要放置于37℃過(guò)夜就可以了，如果有微生物污染會(huì)變渾濁的,，如果 還是澄清的就說(shuō)明沒(méi)有問(wèn)題的,。實(shí)驗(yàn)室中血清很難直接過(guò)濾,，一般要加到培養(yǎng)基中再過(guò)濾。我們實(shí)驗(yàn)室制備培養(yǎng)基時(shí),，都使用濾膜過(guò)濾,，一般而言如果制備1-2瓶培養(yǎng)基，一個(gè)濾膜及一支 30ml注射器可以過(guò)濾50ml小牛血清,。如果大量制備培養(yǎng)基也可以將血清加到培養(yǎng)基中,，使用0.22微米的大濾膜一起過(guò)濾。

2,、問(wèn)：我懷疑我用的*1640培養(yǎng)液被污染了,，準(zhǔn)備重新過(guò)濾消毒，過(guò)濾后是否需要補(bǔ)充胎牛血清,？如需又如何補(bǔ)充,？

答：*1640培養(yǎng)液被污染了，如果是支原體的話,，過(guò)濾沒(méi)有作用,，支原體可以通過(guò)濾膜。我們用1640液,，都是配液后保留500ml,，然后其他的分裝100-200ml，現(xiàn)用現(xiàn)配因?yàn)檠?清比1640要貴,，如果你想過(guò)濾的話,，建議你加原比例血清，因?yàn)镚emini牛血清不會(huì)很容易通過(guò)濾膜,。主要的還是找到可能污染的原因,。

3、問(wèn)：加好了Gemini牛血清雙抗的培養(yǎng)基由于污染了再過(guò)濾后還能用嗎,？

答：建議不要用了,。在加了雙抗的情況下已經(jīng)污染，那么細(xì)菌污染的可能性會(huì)較小了,。一般的過(guò)濾除不能去除病毒或者部分真菌的污染的,。

4、問(wèn)：我準(zhǔn)備把使用的*1640培養(yǎng)液重新過(guò)濾一遍,，不知道培養(yǎng)液中的血清成分是否能通過(guò)濾膜,，過(guò)濾后是否還需要補(bǔ)充胎牛血清？如需又如何補(bǔ)充,？

答：可以透過(guò),，但是隨著液體量的增多會(huì)很慢，如果不加壓會(huì)比較麻煩，還有用低蛋白吸附的,，不然損失是比較大的,。

十六、問(wèn)：懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)能否加Gemini胎牛血清,？如果加了會(huì)有什么結(jié)果,？為什么懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)就不能加Gemini血清？

答：血清是細(xì)胞培養(yǎng)基中重要的培養(yǎng)成份之一,，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有廣泛影響,。在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，我們通常會(huì)加入10%的血清,。血清的質(zhì)量對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的成功至關(guān)重要,。一般說(shuō)來(lái)，牛血清 包括以下成分：生長(zhǎng)因子(如激素,，白細(xì)胞介素等),，他們可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)；貼附因子,，他們可以促進(jìn)細(xì)胞的貼壁,，往往只有細(xì)胞貼壁才能增值(懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞除外)；蛋白質(zhì)(如血清白 蛋白,，球蛋白等),，既可以作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，又可以中止胰酶的作用,；還有很多成分不明的物質(zhì),。血清還可以起到解毒作用，如脂肪酸,、重金屬和某些蛋白酶的毒性。血清還可以是細(xì)胞免受 機(jī)械損傷,。因此,，無(wú)論是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞，血清是*的,。除非因?qū)嶒?yàn)要求無(wú)血清培養(yǎng)時(shí),，例如：為使細(xì)胞同步化時(shí)，我們會(huì)采用無(wú)血清培養(yǎng)的,。單純的說(shuō)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)不能加 Gemini胎牛血清就沒(méi)有太多的道理了,。

十七、關(guān)于中和消化液需要的血清量,。

問(wèn)：用胰蛋白酶消化細(xì)胞后,，需要用血清中和。具體這種中和作用所要求的胰蛋白酶和血清之間的比例是多少？

答：做了很久的試驗(yàn),，真的沒(méi)有想過(guò)胰酶和血清的對(duì)應(yīng)關(guān)系,。不過(guò)細(xì)想下來(lái)，這個(gè)應(yīng)該也沒(méi)有固定的比值,。血清的品種,、產(chǎn)地都是不同的，成分必然有差異,，如何能確定其與胰酶 的比值關(guān)系,？我們消化細(xì)胞的時(shí)候，如果是傳代,，細(xì)胞變形后,，吸出胰酶直接加入適量的hanks液或者全培，這個(gè)量看自己的喜好和吹打細(xì)胞方便而定,。一般都可以中止消化的,。不會(huì)存在 繼續(xù)消化的事情。如果是從組織上消化細(xì)胞做原代培養(yǎng),，我一般都使用全培進(jìn)行中止,，而且加的很多，0.25%的胰酶,，用10%血清,，按1:2的比例應(yīng)該是足夠的。當(dāng)然全培是2,，一般我養(yǎng)細(xì)胞 的時(shí)候,，會(huì)用國(guó)產(chǎn)的比較便宜的血清配制全培，專門用于中止消化,，這樣有幾個(gè)好處：一是中止消化的效果應(yīng)該好于hanks液吧,，再是也有利于維持細(xì)胞活性。而且這部分液體會(huì)被離心去 掉,，血清便宜,，離心掉了不會(huì)心疼。而養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候用好血清,。個(gè)人觀點(diǎn),，僅供參考。

十八,、Gemini胎牛血清新西蘭中的懸浮物問(wèn)題,。

1、問(wèn)：發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的細(xì)胞瓶中背景有許多的小黑點(diǎn),，培養(yǎng)液中也有一些漂浮的物,。看了之前的帖以為是膠原蟲(chóng)。本打算換液,，換液前特意看了下前些天配的培養(yǎng)液,，肉眼發(fā)現(xiàn)培養(yǎng) 液中有懸浮的顆粒狀物質(zhì)(不多)，于是放在鏡下觀察,，新鮮培養(yǎng)液中有一些懸浮的小顆粒,，不多。(培養(yǎng)液是R1640+20%Gemini小牛血清+1%雙抗)于是又將分裝在4℃保存的小牛血清拿出觀 察,，肉眼可見(jiàn)5,、6個(gè)白色小小球狀的物質(zhì)，在血清瓶稍靠下的部位懸浮,。鏡下觀察,，也有少量的不知什么物質(zhì)的東西漂浮。小牛血清是Hyclone新西蘭的,，標(biāo)簽上寫已經(jīng)經(jīng)過(guò)2μm濾膜過(guò) 濾處理,。根據(jù)上述培養(yǎng)液的情況，是否說(shuō)明培養(yǎng)液已被污染,？如果是正常的血清是不是在鏡下不應(yīng)該看到雜物,，哪怕是極少量的？根據(jù)上述血清的描述,，是不是說(shuō)明血清也存在問(wèn)題,，還能 用嗎？補(bǔ)充：細(xì)胞培養(yǎng)以來(lái)生長(zhǎng)狀態(tài)就不好,。買血清的時(shí)候廠家說(shuō)明不用滅活,，所以未滅活。

答：(1)Gemini血清應(yīng)該-20℃保存,，解凍血清時(shí),，請(qǐng)按照的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。

(2)Gemini澳洲血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,，但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白在Gemini胎牛血清解凍后,，也會(huì)存在于血清（例如 Gemini新西蘭胎牛血清）中，亦可造成沉淀物,。

(3)若您一次無(wú)法用完一瓶,，建議您無(wú)菌分裝血清，再放回冷凍,，若存放于4℃時(shí),，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月，儲(chǔ)存在2－8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白,，可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的 混濁,。

(4)解凍Gemini胎牛血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生。

(5)排出了Gemini血清（例如Gemini新西蘭胎牛血清）的原因,，在考慮實(shí)驗(yàn)用品和無(wú)菌操作的問(wèn)題,。

(6)細(xì)菌病毒、衣原體,、黑膠蟲(chóng)污染也很常見(jiàn),，如果細(xì)胞死的太多，影響較大建議更換培養(yǎng)液,。

2,、問(wèn)：今天在配培養(yǎng)液時(shí)，發(fā)現(xiàn)Gemini血清里面有小碎片樣的漂浮物,，血清仍然清亮,，不渾濁。不知道是什么,，問(wèn)了實(shí)驗(yàn)室的學(xué)長(zhǎng),，說(shuō)仍然可以用，但還是不放心,，沒(méi)有用血清 ,。求助園子的各位達(dá)人，這可能是血清出了什么問(wèn)題,？我的血清用了一個(gè)月不到,，四季青的。

答：可能的原因：(1)培養(yǎng)液配置時(shí)Votex不夠,，當(dāng)時(shí)是清亮的,，但過(guò)一段時(shí)間會(huì)析出來(lái)；(2)真菌污染,。

十九,、更換無(wú)血清培養(yǎng)基后細(xì)胞大量死亡的問(wèn)題。

問(wèn)：我使用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞,，在轉(zhuǎn)染前要換上無(wú)血清的培養(yǎng)基,。本來(lái)?xiàng)l件模的好好的，轉(zhuǎn)染效率也可以接受,。但是寒假一回來(lái)就發(fā)生了怪事：細(xì)胞在有血清的培 養(yǎng)基中長(zhǎng)的好好的,，一換無(wú)血清的培養(yǎng)基就死亡,。大概4個(gè)小時(shí)就能看到較多的細(xì)胞飄起來(lái)。但是原來(lái)我換無(wú)血清培養(yǎng)基,，就算放那里10個(gè)小時(shí)都是沒(méi)問(wèn)題的啊,。已經(jīng)換了不同批次的培養(yǎng) 基，甚至吸管什么的都換過(guò)了,，但是就是不行,，是怎么回事？

答：(1)兩周后的培養(yǎng)液應(yīng)補(bǔ)加谷氨酰胺,，或者重新配液,，轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)不含抗生素。

(2)確認(rèn)操作方法和環(huán)境,，建議檢查一下,。

(3)Lipofectamine2000，脂質(zhì)體的毒性很大,，如果有質(zhì)粒參與對(duì)細(xì)胞損傷更大,，如果Lipofectamine2000在常溫放置過(guò)，對(duì)細(xì)胞更大,，假期冰箱是否斷過(guò)電,。

(4)培養(yǎng)箱的溫度、c02濃度,，濕度,。

二十、*培養(yǎng)液的相關(guān)定義,。

問(wèn)：“*培養(yǎng)液一詞”,，是指加了血清的培養(yǎng)液?jiǎn)幔课以谧龊幯宓膶?shí)驗(yàn),，涉及到血清添加量的問(wèn)題,。所以想弄明白文中所指的“*培養(yǎng)液”是否 是含藥血清。

答：原液是指配置后過(guò)濾除菌,。不*培養(yǎng)液是指不含有血清,例如Gemini北美胎牛血清的原液,，其他成分已補(bǔ)充。*培養(yǎng)液是指不*培養(yǎng)液加入血清（例如Gemini胎牛血清 北美）后稱*培養(yǎng)液,。

二十一,、血清相關(guān)知識(shí)總結(jié)。

使用Gemini胎牛血清的注意事項(xiàng)：

血清是細(xì)胞培養(yǎng)中重要的元素之一,。下面是實(shí)驗(yàn)室里使用Gemini胎牛血清,，例如Gemini北美胎牛血清，常會(huì)遇到的問(wèn)題,，僅供大家參考：

1,、保存Gemini牛血清的方法：

建議Gemini血清應(yīng)保存在-5℃ 至 -2O ℃ 。然而,，若存放于 4 ℃ 時(shí),，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶,，建議您無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),，再放回冷凍。

2,、如何解凍Gemini胎牛血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損：

建議您將Gemini南美胎牛血清從冷凍箱取出后,，先置于2～8℃ 冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶,。但必須注意的是,，溶解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

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3,、血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),，該如何處理：

血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但普的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血渭解凍后,，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的 主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,，并不影響血清本身的質(zhì)量。

若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將Gemini血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾,。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀 物,，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過(guò)濾膜。

4,、何謂熱滅活：

一般是以 56℃ ,， 30 分鐘來(lái)處理已解凍的Gemini南美血清，因?yàn)榇思訜岵襟E,，可以使補(bǔ)體去活化,，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有 : 溶細(xì)胞活性，平滑肌的收縮,，肥大細(xì)胞和 血小板組胺的釋放,，增強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞的趨化和激活,。

5,、關(guān)于Gemini胎牛血清的滅活：

有必要做熱滅活嗎？

實(shí)驗(yàn)顯示,，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活Gemini血清,，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的Gemini澳洲胎牛血清（Gemini澳洲血清）對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn) ,，或*沒(méi)有任何作用,，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低,。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,，像 是“小黑點(diǎn)”,，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在 37℃ 環(huán)境中,，又會(huì)使此沉淀物更增多,，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

因此我們建議您,，若非必須,，您可以不需要做熱處理這一步。如此一來(lái),，不但節(jié)省您寶貴的時(shí)間,，更確保您血清的質(zhì)量！

6,、血清相關(guān)知識(shí)：

如何避免Gemini胎牛血清沉淀物的產(chǎn)生,？

我們建議您在使用Gemini牛血清，例如Gemini南美胎牛血清的時(shí)候,，注意下列的操作 :

(1)解凍Gemini胎牛血清南美時(shí),，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物,。

(2)解凍Gemini胎牛血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生。

(3)請(qǐng)勿將Gemini北美血清置于37℃太久,。若在37℃放置太久,，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,，而影響血清的質(zhì)量,。

(4)Gemini南美血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要，可以無(wú)須做此步驟,。

(5)若必須做Gemini胎牛血清的熱滅活,，可以直接購(gòu)買Gemini胎牛血清的熱滅活產(chǎn)品。自己制備Gemini胎牛血清澳洲熱滅活的時(shí)候,，請(qǐng)遵守56℃，30 分鐘的原則,，并且隨時(shí)搖晃 均勻,。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,，都會(huì)造成沉淀物的增多,。